6PCR技术的基本操作和应用.docVIP

PCR技术的基本操作和应用 本卷整理：【粤】 蓝色冰点（庞淇尹 广东省吴川市第一中学） 2012江苏22. 下列事实能体现细胞全能性的是（ ）2012-7-13标记） A. 棉花根尖细胞经诱导形成幼苗 B. 单细胞的 DNA 在体外大量扩增 C. 动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体 D. 小鼠体细胞经诱导培育成小鼠2012-7-13标记） 【答案】AD 【解析】在多细胞生物中每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因，只要条件许可，都可发育成完整的个体。要能产生完整的个体，才能体现全能性。 【试题点评】本题考查细胞全能性这一知识点，要求学生能根据细胞全能性的原理，对一些现象进行分析。属于理解层次。 2012-7-13标记） ①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为 。 ②在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） (2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） ①第1组： ； ②第2组： 。 (3) PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的 功能，这是因为 。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） (4)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb 即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。 33．（8分） (1)①15/16 ②三“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） (2)①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效 ②引物I’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 (3) DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结 合到双链DNA片段的引物链上 (4)见右图 2011北京31.（16分）“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） T-DNA可随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植株形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为 代）。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） （1）为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除 ，因为后者产生的 会抑制侧芽的生长。 （2） 为筛选出已转化的个体，需将T代播种在含 的培养基上生长，成熟后自交，收获种子（称为T代）。 （3） 为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T代播种在含 的培养基上，获得所需个体。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） （4）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与 植株进行杂交，再自交 代后统计性状分离比。 （5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性 。 （6）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是：提取 植株的DNA，用限制酶处理后，再用 将获得的DNA片段连接成环（如右图）以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取 作为引物进行扩增，得到的片段将用于获取该基因的全序列信息。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） 2011安徽31.（21分） Ⅱ.（9分）家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。 （3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。 答案：?（3）TaqDNA聚合酶???对干扰素基因特异性的DNA引物对?? 解析：考查的知识点为动物细胞培养和基因工程. “汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生2012-7-13标记） ? (3)PCR反应体系的主要成分应扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA?、TaqDNA聚合酶、两种引物。“汉水丑生的生物同行”超级群公益作品（汉水丑生20