2008一种快速提取基因组DNA的方法.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（３）：６９～７３ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 技术与方法殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 一种快速提取基因组ＤＮＡ的方法 １ ２ １ １ 卢　瑛 　刘照关 　徐　宏 　古宏晨 （１上海交通大学微纳科学技术研究院微米／纳米加工技术国家重点实验室 薄膜与微细技术教育部重点实验室　上海　２０００３０） （２上海奥润微纳新材料科技有限公司　上海　２００２３３） 摘要　采用氧化硅超顺磁性纳米磁珠和自己设计的试剂体系及提取流程，建立了一种基因组 ＤＮＡ的快速提取方法，该方法以氧化硅磁珠为固相吸附载体，盐酸胍、 巯基乙醇和 ＳＤＳ为主要 β? 裂解吸附试剂。以全血或培养细胞为实验材料进行基因组ＤＮＡ的提取结果显示建立的方法提取 １００ ｌ小鼠抗凝血，可得２～３ｇ基因组ＤＮＡ，ＯＤ ／ＯＤ 为１．８±０．０５，其纯度可满足后续的酶 μ μ ２６０ ２８０ 切和ＰＣＲ生物操作要求。该方法整个提取过程只需１２分钟，不需特殊实验条件同时可省略蛋白 酶Ｋ的消化过程和离心操作，适用于一般实验室的需求，是一种操作简便、快速高效的提取方法。 关键词　氧化硅超顺磁性纳米磁珠　基因组ＤＮＡ　全血　培养细胞 中图分类号　Ｑ５２ 　　ＤＮＡ是遗传信息的载体，是分子生物学研究的主 作较为方便，但该法没有克服需要蛋白酶 Ｋ消化的不 要对象。因此 ＤＮＡ样品的提取和分离纯化也是分子 ［６］ 足。Ｌｏｐａｒｅｖ等 建立了碘化钠（ＮａＩ）全血基因组提取 生物学各类实验不可缺少的一个环节。在临床诊断 法，主要改进在于用促溶剂ＮａＩ代替ＳＤＳ蛋白酶Ｋ裂 ? 中，常从人体组织，如血清或血浆、组织切片等中分离 解细胞和降解蛋白质，从而减少了ＤＮＡ提取时间且降 纯化 ［１～３］ ［７］ ＤＮＡ，然后用于疾病的诊断以及组织配型 。 低了费用。赵书平等 用碘化钾（ＫＩ）代替碘化钠也取 全血因为方便易得，所以是临床分子诊断中主要 ＤＮＡ 得了同样的效果。研究者还发现固相载体，如二氧化 样品的主要来源。目前，用以分离纯化基因组 ＤＮＡ的 硅、玻璃珠、硅藻土等在高浓度促溶剂（如碘化钠、高氯 方法较多，最经典的方法就是ＳＤＳ蛋白酶Ｋ／苯酚 氯仿 ［８～１１］ ? ? 酸钠、胍盐等）存在下能特异性结合 ＤＮＡ 。Ｂｏｏｍ ［４］ 法（简称酚 氯仿法） 。该方法提取的ＤＮＡ纯度较 ［１１］ ? 等 成功地用硅粒或硅燥土从临床标本如血浆或尿液 高，适用于各类分子生物学实验。但是该法所用蛋白 中提取了病原菌基因组ＤＮＡ。目前在实验室中得到广 酶Ｋ消化时间一般需要几个小时，耗时长。此外酚和 泛应用的硅胶离心柱试剂盒也是使用硅基质材料载体 氯仿对人体有害，且易造成环境污染，同时提取过程需 来吸附ＤＮＡ，再通过离心方式以去除其他生化成分如