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肾脏Telocyte细胞系的建立 及功能研究 中文摘要 目的：分离培养鉴定人及大鼠。肾脏Telocyte细胞(TC)，并研究其分布、形态、 超微结构、免疫表型：建立人及大鼠肾脏TC细胞系；探索TC对于。肾小管上皮 细胞(Tubular Cell，TEC)增殖和凋亡的影响：验证间充质干细胞 Epithelial Stem Cell，MSC)通过旁分泌方式促进。肾小管上皮细胞增殖并抑 (Mesenchymal 制其凋亡的作用；揭示TC作为MSC支持细胞的作用机制；研究TC与MSC细 胞对话在肾脏损伤修复中的作用。 方法：利用原代细胞培养、免疫组织化学、透射电镜等方法发现人及大鼠。肾脏 TC并了解其形态、分布及超微结构；利用细胞免疫荧光、活细胞染色及线粒体 标记等方法鉴定肾脏TC；通过差时贴壁、显微切割、传代等细胞培养技术纯化 肾脏TC并建立TC细胞系；利用Cell—IQ技术探索TC生长规律及作为干细胞 支持细胞的功能相关性形态学特征；利用成骨及成脂诱导液对肾脏TC进行体外 诱导分化；培养大鼠MSC细胞，并利用流式细胞仪、诱导分化等方法进行MSC 鉴定：利用MillicelllM系统建立共培养体系，实现大鼠肾脏TC与TEC的共培养、 作用机制：建立大鼠肾脏缺血再灌注动物模型，通过阴茎背静脉给予TC共培养 预处理的MSC，利用肾脏损伤病理评分及TUNEL评分研究TC与MSC细胞对 话在肾脏损伤修复中的作用。 结果：人及大鼠肾脏皮质中存在TC，TC常位于肾小管及小血管周围间质，紧 密包绕肾小管或间质小血管；肾脏TC具有特殊的形态特征，细长串珠样的突起 Tp，Podom及Podomer结构明显，胞内线粒体发达，富含分泌性囊泡及致密颗 粒，表达CDl 及IHC未发现肾脏髓质中存在TC，但髓质标本原代培养可观察到TC，其占总 细胞总数的比例较皮质小；肾脏TC稳定传代至40代，表型稳定；肾脏TC的体 外诱导分化未显示其成脂及成骨潜能；MSC与TEC共培养可显著促进TEC的 增殖并抑制其凋亡，且MSC对TEC的促增殖抑凋亡作用通过旁分泌方式实现： TC与TEC共培养不能直接促进TEC的增殖或抑制其凋亡；经与TC共培养预处 理的MSC，其对TEC促增殖抑凋亡的作用较单纯MSC的效果显著增强，提示 TC可以通过旁分泌方式增强MSC的肾脏保护作用；经阴茎背静脉给予TC预处 理的MSC可显著减轻肾脏缺血再灌注损伤，改善肾功能。 结论：人及大鼠肾脏皮质中存在TC，其形态特征、免疫表型均符合经典TC标 准；成功建立肾脏TC细胞系；TC可作为一种干细胞支持细胞，通过旁分泌方 式增强MSC的肾脏保护作用；经与TC共培养预处理的MSC显著减轻肾脏的缺 血再灌注损伤，提示TC可作为MSC支持细胞促进肾脏的损伤后修复。 关键词：Telocyte；Telopode；肾间质；MSC；缺血再灌注损伤 中图分类号：R692．6 一 · ‘ 1一 ·‘ ■ J● 一 ● LineconstructionancIIUnction 0Ian0Vel eXDloratlon of interstitial 锣pe kidney cell-Telocyte Abstract andculture unveilthe objectives：Toisolate，identifyTelocyte(TC)inkidney．To of TCs．To distribution，morphologicalprofiles，ultrastmcture，phenotypekidney TC andconstructTCcellline．To