疏筋解毒方抑制黑质细胞凋亡缓解PD作用机制的研究.pdfVIP

摘 要 目的：实验从脑病理组织切片、黑质部位凋亡细胞的形态和数量以及钙离子含量的变 化方面来探讨疏筋解毒方对6—羟基多巴胺（6—hydroxydopaminne,6—OHDA ）所致 帕金森病（Parkinson ’s disease，PD ）大鼠模型的防治作用，从而揭示疏筋解毒方保 护多巴胺（dopamine ，DA ）能神经元以及对 PD 治疗作用的可能机制，为中药治疗 PD 提供一定的实验依据和临床参考。 方法：实验选取Sprague-Dawley （SD）雌雄各半的大鼠，随机分为六组：假手术组、 模型组、左旋多巴（L-dopamine,LD ）组（LD 组）、疏筋解毒方小剂量组（SJS 组）、 疏筋解毒方中剂量组（SJM 组）和疏筋解毒方大剂量组（SJL 组）。采用偏侧黑质纹 状体6—OHDA 立体定位注射术建立PD 大鼠模型，分别进行了PD 大鼠行为学观察； 应用HE 染色法在普通光学显微镜下观察了脑病理组织切片；应用黑质致密部DNA 末 端标记法检测了凋亡细胞的形态及数量；应用甲基百里香酚蓝比色法检测了黑质纹状 体组织钙结合蛋白的含量。 实验结果： 1 疏筋解毒方对PD 大鼠黑质组织形态的影响 HE 染色结果：与其它组相比，SJM 组大鼠中脑黑质神经细胞较丰富，排列较密 集，形态及体积基本接近正常。 2 疏筋解毒方对PD 大鼠中脑黑质神经元凋亡的影响 TUNEL 染色结果：关于凋亡细胞数目，各治疗组与模型组比较均有显著性差异， P ＜0.01 ；而中药组与西药组比较也有显著性差异，P ＜0.01 ；且SJM 组与其它组比较 均有显著性差异，P ＜0.01 。关于阳性目标面密度比较，SJS 组范围最大，除假手术组 外LD 组范围最小。关于阳性目标数密度比较，除模型组外LD 组值最大，除假手术 组外SJM 组值最小。 3 疏筋解毒方对PD 大鼠黑质纹状体钙结合蛋白含量的影响 甲基百里香酚蓝比色法结果：LD 组与模型组无差别；SJS 组和SJL 组与模型组 比较有显著性差别，P ＜0 ．01 ，但与假手术组比较也有差别，P ＜0 ．05 ；而SJM 组 与模型组有差别，P ＜0 ．05 ，与假手术组无差别。 结论： 1 中剂量的疏筋解毒方可以有效地改善PD 大鼠黑质组织的形态，对PD 中脑神经元 及神经细胞具有保护作用。它可能通过修复受损的神经细胞，恢复细胞产生DA 的功 能，增加体内DA 的含量，从而达到DA 与Ach 两种神经递质的平衡，从根本上改变 PD 大鼠体内的生化代谢状态，阻止疾病的进程，对PD 大鼠产生一定的脑保护作用。 2 疏筋解毒方可能对细胞氧化应激条件下的凋亡通路具有抑制作用，从而阻抑DA 能 神经元的变性，其中中剂量的疏筋解毒方抑制黑质细胞凋亡、保护中脑DA 神经元的 浓度最为合适。 3 中剂量的疏筋解毒方可能通过抑制氧化应激反应，修复细胞膜结构，改善细胞内线 粒体功能缺陷，抑制细胞内钙超载，减少自由基产生，防止细胞凋亡，恢复受损神经 元及神经细胞的作用，调节血液酸碱度，从而全面治疗PD 。 关键词：疏筋解毒方；帕金森病；细胞凋亡；机制研究 The Experimental Study of the Functional Mechanism of the Shujin Jiedu Prescription to Inhibit substantia nigra apoptosis and Mitigate PD Abstract Aim：Through the PD big mouse behavior study the brain pathological tissue slice up observation,examinating the shape and quantity of apoptotic cells and the change of the calbindin content in substantia nigra, the experiment discusses the prevention and curl function of the Shujin Jiedu Prescription to the PD big mouse model established by 6—OHDA,reveals the possible mechanism of