移植ERK1%2f2基因修饰骨髓间充质干细胞对缺血性脑卒中大鼠神经保护作用.pdfVIP

目 录 1 移植ERK1/2 基因修饰的骨髓间充质干细胞对缺血性脑卒中大 鼠的神经保护作用……………………………………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………4 1.3 前言……………………………………………………………7 1.4 材料与方法……………………………………………………9 1.5 结果……………………………………………………………27 1.6 讨论……………………………………………………………38 1.7 结论……………………………………………………………46 1.8 参考文献………………………………………………………47 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………50 2 致谢……………………………………………………………50 3 骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性脑卒中的研究进展（综 述）……………………………………………………………54 1 移植ERK1/2 基因修饰的骨髓间充质干细胞对缺血性脑卒中 大鼠的神经保护作用 摘 要 目的：探索细胞外信号调节激酶（Extracellular signal-regulated kinase ，ERK)基因修饰的骨髓间充质干细胞( Bone marrow derived stroma cell,BMSCs)移植是否比单纯BMSCs移植对缺血性脑卒中有更 好的神经保护作用。方法：构建ERK1/2重组质粒并转染BMSCs ，建 立过表达ERK1/2 的BMSCs （ERK1/2/BMSCs ），通过对实验动物手术 制备大鼠短暂性大脑中动脉阻塞 (Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,并随机分为空载体转染的骨髓间充质干细胞移 植组即BV/BMSCs组、ERK1/2基因修饰骨髓间充质干细胞移植组即 ERK1/2/BMSCs 组和不移植骨髓间充质干细胞组即Control组，再灌 注3d时通过脑立体定位分别移植空病毒转染的BMSCs （BV/BMSCs ）、 ERK1/2基因转染的BMSCs(ERK1/2/BMSCs)和给予生理盐水。细胞移 植1周、2周时处死大鼠，用神经功能缺失评分（Modified Neurological Severity Score，mNSS ）评估不同组缺血性脑卒中大鼠术后神经功能 变化、TTC染色评估ERK1/2/BMSCs组、BV/BMSCs和Control组三组 大鼠脑梗死体积改变情况、HE染色观察各实验组脑组织病理学变化； 尼氏染色计数ERK1/2基因修饰BMSCs移植组、空病毒转染的BMSCs 移植组和移植生理盐水组缺血周边额顶叶皮质的神经元数目；荧光显 微镜下观察移植ERK1/2/BMSCs 组和BV/BMSCsBMSCs 组宿主脑内 存活数量，免疫荧光染色显示胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic 2 protein,GFAP ）在三组MCAO大鼠脑缺血周边区的表达情况。结果： 1. RT-PCR 和western blot 检测显示ERK1/2/BMSCs 细胞系过表达 ERK1/2 。2. 与Control组相比，ERK1/2/BMSCs组和BV/BMSCs组的 mNSS评分在1W和2W时均明显降低 (P0.05) ，而且ERK1/2/BMSCs 组比BV/BMSCs组的的mNSS评分更低(P0.01) 。3.ERK1/2/BMSCs组 和BV/BMSCs组的大鼠脑梗塞体积比Control组显著减少(P0.05) ，但 ERK1/2/BMSCs组和 BV/BMSCs组之间差异无统计学意义(P0.05) 。 4. 尼氏染色结果显示，1W时ERK1/2/BMSCs组缺血周边区神经元数