小白菊内酯对人膀胱癌5637细胞的体外抑制及机制研究.pdf

Ⅻ扛，t半博士学位瞳上 t·卫m皿 小白菊内酯对人膀胱癌5637细胞的 体外抑制及其机制的研究 淅江大学医学院 外科学(泌尿外) 博士研究生 程 广 导 师 谢立平 教授 中文摘要 第一部分小白菊内醋对人膀胱癌s637细胞增殖和细胞周期的影 响 缸膪周期的影响及其可能机制。 方法采用M丌沽观寮不同娘度蛐小白菊内酯(o：2．5，5．o，7+5和10州)作用 不同时问(24h和48h)后对人腑肮癌细胞象5∞l，7圭|胞增建的崭”向：同时应用集 1 落形成试验观察不刊站度曲小自骑内甜【0 2．5，5．o，7．5和10l州)对5637姻胞 集菩彤成的影响。莸取不同浓度小占菊内醛(0÷2．5÷5．o，7．5和lO州)仁用24 小时的j637细胞，碘叶h丙锭(P1)染色后经流式细胞仪检疽[．井对获取数据进行 细胞闫期舟析。应用№咖mblom蚰g方法牡刮0与细胞匿期卅￡节相关蛋白Cycl血Dl 和CDK2．p．cDK王、(：T)K4的表适，来观察小白菊内酷对其表造水平的靴响。 Ⅱ 仕i}I★学博+学位论立 +上}匀要 结果 1．小白菊内酯能显著抑制人膀胱癌5637细胞的增殖，并随药轴玻度的井高 和目{问依赖性。 为9．5，40％，而在4品h后的抑糊率舟剐变为23．9—79％。 冀．小白萄内酯自邕显著抑制人膀胱癌5637细胞集茫形成，并随着浓度的增高集落 形成幸逐步下撵，在敢度1o扯M时集藩形成抑制率达到87．7％。 膀脘癌5637细胞24小时后，可咀使61期细胞增多，生嚣01茹m滞，并呈 剂量依赖性；s娟细胞减少；G2／M期细胞与对照垤比较无明显变亿． 睦着作用浓度的增加÷可毗使CyclinD1和p￡D鼬减步，并有显芒蛀湿度依 觞性。 结论小白菊内酵能且著抑制^繁胱癌5637}丑胞曲增殖和集落形成，其抻制作用 呈对问和剂量依5|!}l性．小白药内酯能显著掉制5637细胞中CyclinD1和p—CDK2 的表达，其可能是诗导5637扫胞Go，G1期阻滞畸分子机制之一。 第二部分小白菊内酯对人膀胱癌5637细胞凋亡的诱导作用 目的研究小白菊内百}在体外对人膀胱癌细胞景5637细胞曲凋亡诗导群：用!并棵 讨其诱导凋亡的相关分子机制． 的凋亡形态学菠变。采用流武细胞戗(PI和mn“血V腮染浩)槛剥细胞阔亡率的 『【『 新江上学博士学位皓Z r}1土_摘要 变化．采剧帆stembl。m吣方法检删不同艘度小白薪由酯【()，2．5，5．O，7，5和 Bcl．2家族等蛋白在小白菊内酯诱导细胞捌亡中表达水平的变化。 结果 1． 不阿难度小白靖内酯(o，2．5，5．0，7．5和louM)作用于5637细胞4s小时后 能明显谙导细膻谰亡，稠亡的诱导作用呈显著剂量依赖性。 2． 蓑光显散镜显示车同、旅度小吉菊内酯(0，2．5；5．0：7．5和10¨M)乍用于5637 细胞48小时后使蜘胞密度呈剂量依赫性降慨。同时观察到髑亡细胞肝具有的 典型形态学改变。 3． 通过矗￡式细胆仪(PT和咖cx_11V飘染往)检删发靶小白薪内酯作用于5637 细胞48小时看细施凋亡呈剂量依桢性增加。小白萧内酯(2．5．10山)作用48 小时后产生的早期碉亡细葩舟副为8．I％．16．5％，晚期蜩亡臼胞分别为 5．1％．86．6％。 7．O％．70．】％，怎曲捌亡归胞为1 蜘胞PARr被鼓活，呈显著曲波度依赖性，袁现为裂解曲P眦¨片段(89KD) 出现+ 5． 小白苇内酣(0—1o“M)作用56=；7细胞48小时舌，随着作罔i