《TRV病毒介导的基因沉默体系在棉花中的建立及应用》.pdfVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2014，4O(8)：1356—1363 http：／／zwxb．chinacrops．org／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．ca DoI：10．3724／SP．J．1006．2014．01356 TRV病毒介导的基因沉默体系在棉花中的建立及应用 王心宇 ， 吕 坤 蔡彩平2 徐 君 2 郭旺珍 南京农业大学生命科学学院，江苏南京210095；南京农业大学农学院 ／作物遗传与种质创新国家重点实验室，江苏南京 210095 摘 要：以陆地棉CLA1基因为标记基因，利用烟草脆裂病毒(tobaccorattlevirus，TRV)载体建立基于病毒介导的棉花 基因沉默体系(virus—inducedgenesilencing，VIGS)。病毒 RNA2的RT-PCR分析证明，棉花子叶接种TRV病毒后，该 病毒可高效扩散到受体的根、茎、叶等器官。利用TRV-VIGS体系同时诱导 34份不同来源棉花材料 CLA1基因沉默， 尽管不同材料间的抑制程度有差异，但均可有效抑制 CLAI基因的表达，说明该体系在棉花研究中的广谱利用性。 GhMAPKKK 基因受黄萎病菌诱导表达，接种后 96h表达量达到高峰 。利用 TRV-VIGS体系，成功抑制了棉花 GhMAPKKK基因的表达，与对照株相 比，抑制后的棉花植株接种黄萎病菌后更易感病，说明 GhMAPKKK参与了棉 花对黄萎病菌的抗性反应 。具有广谱性、灵敏性和高通量等特点的棉花 TRV-VIGS体系建立将加速棉花功能基因组 研究进程。 关键词：棉花；TRV-VIGS；GhCLA1；GhMAPKKK；黄萎病 EstablishmentandApplicationofTRV-M ediatedVirus-InducedGeneSilencing inCotton WANGXin—Yu，，LOKun，CAICai．Ping，XUJun，andGUOWang—Zhen CollegeofLifeSciences，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China；StateKeyLaboratoryofCropGeneticsGermplasmEn— hancement／CollegeofAgriculture，NanjingArgiculturalUniversiyt，Nanjing210095，China Abstract：UsinguplandcottonGhCLA1asmarkergene．tobaccorattlevirusinducedgenessilencing(TRV—VIGS)wasestab— lishedincotton．A generfagmentofTRV subgenomicRNA2wasamplifiedbyreversetranscription—polymerasechainreaction (RT—PCR)inroot．stemandleafofcotton．demonstratingtheviruscanspreadintovariousorgans．TheTRVinducedsilencingof CLA1genewasfurthertestedin34differentcoRonvarieties(1ines)originatedfromseveralecologicalregionsofChina．There— suitsshowedthatC Jcouldbesilencedinalltestedvarieties(1ines)，thoughthelevelsofsilencingshowedalittledifference， implicating wide application perspectiveofTRV—VIGS system in coRon．GhMAPKKK,amitogen—activated protein kinase (MAPK)kinasekinasegeneofcoRon，WaSup—regulatedincottonat96hourspostinoculationbyVerticilliumdahliae．Silencing GhMA尸 K inG．barbadenseCV．Hai7124