《反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸》.pdfVIP

反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸 黄慧敏，张伟国 (江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 ，214122) 摘 要 采用反相高效液相色谱法分析测定苹果酸发酵液中的有机酸，最终确定 了适用于发酵液 中各种有机 酸含量测定的色谱条件 ，色谱柱 ：COSMOSIL5C PAQ(4．6mmI．D．×250mm)；紫外检测波长：210nm；流动 相 ：1％乙腈 一20mmol／LKHPO 溶液 (pH2．8)；流速 ：O．5mL／min；柱温 ：23~C。结果表 明，在该条件 下苹果 酸发酵液 中的7种有机酸都得到了较好分离，方法 的回收率为94．2％一102．7％，表 明具有较好的准确度和精 密度。 关键词 反相高效液相色谱法，苹果酸发酵液，有机酸 一 苹果酸是一种重要 的天然有机酸 ，其 口感接 仪器：DIONEX高效液相色谱仪 (DIONEXP一 近天然苹果的酸味，在国外是用量很大的一种酸味 680泵、ASI一100 自动进样 器、TCC一100柱温箱 ) 剂 。在食 品、医药 、印染及化工等方面都有广泛 的 (美国DIONEX公司)。 用途 ，已成为继柠檬酸 、乳酸之后用量排第 3位 的 试剂 ：草酸、苹果酸 、仪．酮戊二酸 、柠檬酸 、琥珀 食品酸味剂，是一种很有发展前途的有机酸新产 酸 、KH：PO 、H。PO 等均为分析纯 ，购 自国药集 团化 口 [1] 口口 。 学试剂有限公司；水为超纯水 ；乙腈为色谱纯 ，购 自江 直接发酵法是生产苹果酸 的较有竞争力 的方 苏汉邦科技有限公司；流动相、对照品和样品溶液使 法 ¨ ，如何快速准确地测定发酵液 中的 ．苹果 用前均经0．45 m的滤膜过滤。 酸则是发酵过程 中首先需要解 决 的问题 。有机酸 1．2 色谱条件 的定量测定方法有许 多种-o ，而定量分析发酵 色谱柱 ：COSMOSIL5C PAQ(4．6mm I．D．X 液 中苹果酸的方法 主要有 2，7一萘二酚法和反 2507／／／／1)(日本半井 公 司)；流动相 ：1％ 乙腈-20 相高效液相色谱法 。由于苹果酸发酵液成 mmol／LKH2PO 溶液 (pH2．8)；流速：0．5mL／min； 分复杂 ，包括残糖 、菌体 、蛋 白和各种有机酸等物 进样量 ：10 L；柱温：23~C；紫外检测波长 ：210nlTl。 质 ，在采用 2，7一萘二酚法测定苹果酸含量 时需要 1．3 标准溶液的配制 使用浓硫酸 ，而浓硫酸具有强氧化性 ，可将许多物 1．3．1 混合标准溶液 的配制 质氧化包括发 酵液 中的物质和试 管 中的残 留杂 准确称取草酸 16．5mg、苹果酸48．3mg、柠檬酸 质 ，从而对测定结果 的准确性产生强烈 的干扰 ；而 65．3nag、丁二酸 91．6mg、富马酸 2．4mg、一酮戊二 反相高效液相色谱法操作简便，准确度高，重现性 酸20．3mg、丙酮酸25．7mg，用超纯水溶解并定容至 好 ，可同时定量多种有机酸 ，因此 已获得广泛 的应 100mL配制成有机酸标准混合溶液。 用 ¨ 。本研 究选用 日本 的 COSMOSIL5c 1．3．2 有机酸系列标准品溶液的配制 PAQ色谱柱 ，在磷酸盐缓冲液 中添加适量 的乙腈 ， 分别称取柠檬酸500mg、草酸50mg、丁二酸500 利用反相高效液相色谱法对苹果酸发酵液 中有机 mg、苹果酸50mg、富马酸50nag、丙酮酸 100mg、d一酮 酸进行定量分析 。 戊二酸 100mg，用超纯水溶解并定容至