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-----TGTGA--------TCACT---GTGTATTGACATGATAGAAGCACTCTACTATATTCTCAATAGGTCCACG- -----ACACT--------AGTGA--CACATAACTGTACTATCTTCGTGAGATGATATAAGAGTTATCCAGGTGC- 共有序列 -35 -10 +1 (三)激活蛋白：对转录起正调控作用 1．正调控蛋白可结合启动子邻近序列进行调控 2．激活蛋白结合增强子可远距离进行转录起始正调控 (三)激活蛋白：对转录起正调控作用 三、原核基因转录：通过不同模式进行调控 (一)正调控和负调控对转录起始进行双重调控： 1、乳糖操纵子： CAP（正性调节）？ 阻遏蛋白（负性调节） 乳糖操纵子由cAMP-CAP系统进行正调控 TTTACA TATGTT N17 N6 A lac TTGACA TATAAT 共有序列 乳糖操纵子是弱启动子，被RNA-pol结合后，还需cAMP-CAP（分解代谢物基因活化蛋白）活化 -35区 -10区 + + + + 转录 无葡萄糖，cAMP浓度高时 有葡萄糖，cAMP浓度低时 Z Y A O P DNA CAP CAP CAP CAP CAP CAP CAP CAP结合位点 mRNA 低半乳糖时 高半乳糖时 葡萄糖低 cAMP浓度高 葡萄糖高cAMP浓度低 RNA-pol O O O O Ｉ Ｉ 无转录 无转录 低水平转录 3)+葡萄糖 +半乳糖 Summary 乳糖操纵子的实际应用 乳糖操纵子结构常被构建到原核表达载体上，调控重组基因的表达 Plac 第 二 节 真核基因表达的转录水平调控 Transcriptional Regulation of Eukaryotic Gene Expression RNA Polymerase II TFIIF TFIIE TFIIB TFIIA TBP +10 +20 Start point -10 -20 -30 -40 +1 ATG TATA transcription 图 The basic process of RNA pol. II recognizing and binding TF-DNA complex. forming initiation complex. 说明: 转录起始：1). TFII D先与TATA box 结合， 然后TFIIA、TFIIB（解链酶活性）结合于TFIID， 随后，RNA聚合酶在TFIIF的辅助下与TFIIB结合。 RNA聚合酶就位后,TFIIE、TFIIH等加入,形成转录起始复合物。 基因开关的分子机制：真核细胞比原核复杂 基本共同点：转录起始的调节是关键点 根本不同点： 原核生物：启动子在缺少调节蛋白情况下就具有天然活性 真核生物：启动子在缺少调节蛋白的情况下往往没有活性 真核细胞基因及其调控区域受到染色质结构的限制，转录的活化与转录调控区域、转录区域内染色质结构的诸多变化相关； 正性调节是主要形式。因此，在转录的基本状态受到制约的情况下，使得每个真核细胞基因需要活化才能被转录； 真核细胞有更大、更为复杂、种类更多的调节蛋白。单一启动子可以被分散在DNA分子上、数量近乎无限的调节序列所控制。 基因表达起始的调控：真核细胞与原核细胞 一、转录起始调控： 转录起始复合物的组装 RNA聚合酶II：需要诸多蛋白质因子的协同作用 基因活化蛋白质与增强子结合后，通过与全酶复合体中的中介子相互反应，使全酶复合体在空间上更接近启动子并有效组装。 一、转录起始调控：转录起始复合物的组装 一、转录起始调控：转录起始复合物的组装 ①活化蛋白：增强子 ②通用转录因子：启动子 ③中介子：蛋白质之间 TATA盒 TF IID RNA聚合酶II 通用转录因子 转录方向 中介子 活化蛋白 活化蛋白 增强子 增强子 DNA TF IIA 最后形成稳定的转录起始复合物，启动转录。 几种转录调控模式： 1) DNA 成环靠近RNA pol 结合位点 TBP 基因转录 RNA Polymerase II RNA Polymerase II RNA Polymerase II 2) 反式作用因子使DNA构型发生扭曲变形 TBP RNA Polymerase II RNA Polymerase II 基因转录 3) 反式作用因子沿着DNA滑动 TBP RNA Polymerase II RNA Polymerase II 基因转录 4) 反式作用因子通过连锁反应影响转录 TBP RNA Polymerase II RNA Polymerase II 基因转录 （一）mRNA： 5’端加帽和3’端加尾 除组蛋白外，所有真核细胞mRNA都