Gαq介导信号通路增强RGS4蛋白表达.pdfVIP

生物物理学报 2014年8月 第30卷 第5期：336—348 、^～n^f．cjb．or9．ca ACTA BIOPHYSICA SINICA Vo1．30No．5 Aug．2014：336—348 G q介导的信号通路增强 RGS4蛋白表达 虞梅芳 ， 王进城 1,2,3， 卫涛涛 ， 黄有国 ， 屠亚平 1,3 1．中国科学院生物物理研究所，生物大分子 国家重点实验室，北京 100101； 2．中国科学院遗传与发育研究所 ，北京 100101； 3．DepartmentofPharmacology，Creighton University SchoolofM edicine，Omaha，Nebraska，USA； 4．中国科学院大学，北京 100049 收稿 日期：2014．05．29；接受日期：2014．07．23 通讯作者：屠亚平，电话：(010E—mail：yapingtu@creighton．edu 摘要：RGS (regulatorsofG proteinsignaling)是G蛋 白偶联信号通路中一类重要的调节蛋 白， 通过加速 G 结合的GTP水解 ，即GAP (GTPaseactivatingprotein)活性，来中止G蛋 白信号 通路。RGS4是 RGS蛋 白家族 中的重要成员之一，它能有效中止Gaq介导的信号通路。作者研 究了Gaq蛋 白对RGS4蛋 白的表达调控。当在HEK293细胞中共转染这两个蛋 白时，持续性激 活的Gaq能特异性地显著增加 RGS4蛋 白的表达。蛋 白降解实验结果证 明这种增强作用与RGS4 的降解被抑制无关，而与RGS4mRNA表达增强有关。进一步克隆RGS4蛋 白的启动子 区域并 研究其与RGS4表达相互关系的实验结果又表 明，持续性激活的G q能够显著增强RGS4启动 子 区的转录 活性 ，且具有时 间和 浓度效应。 同时 ，转录 因子结合 区突变体 实验证 明 ，ICE (invertedCCAATboxelement)转录因子结合 区的突变显著影响RGS4基因的转录活性。以上 结果表明G q可能通过RGS4的启动子 区调控其基 因的表达 ，促进 RGS4蛋白表达。 关键词：G0q【；RGS4蛋 白表达；ICE转录因子结合 区；转录调控 中图分类号：Q7 DoI： 】0．3724／SP．J．1260．2014．40068 引 言 G蛋白偶联的信号转导通路 (Gprotein—coupledsignaltransductionpathways)参与动物、 植物乃至微生物的许多重要生理功能的调节，如视觉和味觉的形成、心脏活动、神经功能 活动、血糖水平调节、毒品成瘾和麻醉生理等[ 。RGS蛋白是一类 G蛋白调节蛋白，通过 其RGS结构域和非RGS结构域参与细胞信号传导的调控f51。其中，RGS4是RGS家族中具 有重要功能的一个蛋白，可作为多功能的支架蛋白组装有关的信号蛋白，从而调节信号传 导。研究表明，RGS4参与了雌激素受体某些非基因组效应的调节f6]。我们实验室前期研究 表 明RGS4抑制乳腺癌 的转移 。所以，研究RGS4基因表达 的调控机制是非常必要的。 RGS4属于RGS蛋 白家族 R4亚类 ，对 God亚类和 GoLq亚类 具有特异性 的GAP活性 。 RGS4本身的功能受到多层次的调控圈。在蛋 白水平，RGS4通过N。端被蛋白酶体降解而调 虞梅芳等：GoLq介导的信号通路增强 RGS4蛋 白表达 控其表达 9】；在 mRNA水平，RGS4转录水平调节的最早研究是关于神经特异性转录因子 Phox2b与RGS4在发育过程中的协同表达，提示组织特异性的转录因子可能是RGS4组织 特异性表达的原因之一。进一步研究表明，其它一些与NF．KB相关的信号通路、NF．Y 转 录因子等也参与RGS4的调节 。RGS4也可通过 Tra231fsplicingfactortransformer．2B)对 其mRNA前体进行选择性剪接，得到不同功能的蛋白[11】。细胞水平上的研究也提示，激活 Gas生成的cAMP显著增加RGS2基因的表达㈣。但是，激活G 对 RGS4蛋白表达的影响 还未见报道。我们在实验中发现 G0lq能调控RGS4蛋A的表达。 材料与方法 细胞系 HEK293细胞来 自AmericanTypeCultureCollectionfATCC)，细胞培养在含有 10％胎 牛血清的DMEM (Dulbecco’SmodifiedEagle’