大黄素甲醚影响巨噬细胞[Ca2+]i变化和TNF-α释放作用特征.pdfVIP

2+ 大黄素甲醚影响巨噬细胞[Ca ] 变化和TNF-α释放的 i 作用特征 王新宇，张莉平，刘慧君，陈立君，杨文修 南开大学生物物理系，生物活性材料教育部重点实验室（300071） email: Yangwenx@ 摘要：应用 L929 细胞系和MTT 法检测TNF-α量，同时用细胞[Ca2+] 荧光图像分析系统检 i 测单细胞[Ca2+]i 变化动力学，以研究大黄素甲醚（Physcion ，Phy ）对正常的和细菌脂多糖 (LPS ）刺激的大鼠腹腔巨噬细胞（PMφ）释放肿瘤坏死因子（TNF−α）和[Ca2+] 动态变化的 i 影响。结果显示，大黄素甲醚对正常 PMφ能适度促进其释放 TNF−α和升高[Ca2+] ，两种效 i 应都随药物浓度增加而增强；同时，大黄素甲醚显著抑制LPS 刺激的PMφ 过度释放TNF−α 和升高[Ca2+] ，而两种抑制效应则随着药物浓度的增加而迅速衰减。以上结果说明，大黄素 i 甲醚对PMφ 释放TNF-α和升高[Ca2+] 表现出双向调节作用，但其活化正常细胞免疫功能与 i 抑制失控释放炎性细胞因子的剂量依赖关系相反。研究表明，大黄素甲醚调节PMφ的[Ca2+]i 变化可能是其调控细胞释放TNF−α的信号传导通路中的重要环节。 关键词：大黄素甲醚；腹腔巨噬细胞；脂多糖； TNF−α； [Ca2+]i 1 引言 多脏器功能不全综合征（multiple organ dysfunction syndrome ，MODS ）发病机制及 其防治是急救医学研究的焦点之一。研究表明，由于肠源性内毒素（细菌脂多糖， Lipopolysaccharide ，LPS ）激活单核细胞、巨噬细胞等，促使其过量释放肿瘤坏死因子α （TNF−α）、白细胞介素−1 （IL−1）等炎性细胞因子，进而通过损伤内皮细胞、激活补体等 途径造成多种脏器组织的损害，引发 MODS[1,2] 。近年关于LPS 刺激巨噬细胞释放 TNF-α等 炎性介质的信号通路的研究表明， LPS 通过与细胞膜上受体形成的多聚体转导信号入胞后， 可激活 PKC 、MAPK 、PKA 、CaMPK 等多条相互关联的激酶级联通路，活化多种转录调节 因子，促使TNF-α等炎性细胞因子的基因表达和释放[3,4,5] 。Ca2+作为胞内第二信使，处于多 种细胞信息传递途径的中心位置，广泛的参与多种细胞生理和生化过程。对多种细胞的大量 实验表明，细胞内自由 Ca2+浓度（[Ca2+] ）的变化在胞内信号转导、基因表达调控方面有非 i 常重要的作用[11,12,13] 。但目前对LPS 诱发巨噬细胞[Ca2+] 暂态变化特征及其调控炎性介质释