人体酒精测定.ppt

* 人体酒精测定 电信061 张鹏赞 0608140813 大的方面可以分为两种方式： 1.血液测量法 2.呼气测量法 血液测量法： 1.湿化学法 2.酶法 3.气相色谱法 呼气测量法 1.湿化学法 2.气相色谱 3.电化学法 4.红外光谱法 湿化学法： 原理：采用滴定法 3C2H6O+2K2Cr2O7+8H2SO4=3CH3COOH+2Cr2(SO4)3(绿色)+11H2O+2K2SO4 用一特殊制造的E型玻璃毛细管从指尖或耳垂取约一定量的血，此毛细管事先涂布一层薄氟化钾和草酸钾的混合物以防止血液凝固。将血样置于特殊设计的锥形瓶中，内置过量重铬酸钾和浓硫酸，瓶颈上加一玻璃杯后放50℃水浴加热2h，进行乙醇扩散及氧化。反应结束后剩余重铬酸钾用碘滴定法测出 缺点： 湿化学法虽然原始却能测出是饮用过酒精。然而湿化学方法的最大缺陷是不能准确测出血液乙醇浓度，因为有其他挥发性气体的干扰，如甲醇、丙酮、乙醚等，它们也参与氧化反应从而导致较高的血醇浓度。 酶法： 原理： 乙醇脱氢酶（ADH）从肝脏和酵母中分离出来 血液样本加入酸使蛋白质凝固，然后加入缓冲液（buffer solution）调整pH值至9.6,加入ADH、ALDH（乙醛脱氢酶）和辅酶NAD+。辅酶NAD+在氧化过程中转变为NADH，测定NADH在340nm处的紫外光分光光度计吸收值，据此推算出乙醇的定量分析。 优点： 同湿化学方法相比，鉴于丙酮和乙醚等不是此酶的适合底物，这一方法大大提高了检测的特异性，同时也可准确地检测糖尿病病人的血醇浓度。通过调整酶化学反应条件如pH值、反应时间、温度、乙醇脱氢酶等，甲醇就可氧化缓慢，而不至于干扰乙醇。另外，这一方法操作也较简单，并且可以实现自动化，这在需检测大量检本时广泛应用 气相色谱法： 原理：将样本混合物注入固定（stationary phase），并由另一流动相（mobile phase）流过此固定相，由于样本混合物中各组分在不同的两相中溶解、解析、吸附、脱离及其他亲和力作用方式的差异，两相作相对运动时，各组分在两相中反复多次受到上述各作用力的作用，因而各组分以不同的速度在固定相上移动，从而得以互相分离。最后采用各种检测手段对各种组分进行定性和定量分析。 气相色谱法是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。气固色谱的“气”字指流动相是气体，“固”字指固定相是固体物质。例如活性炭、硅胶等。气液色谱的“气”字指流动相是气体，“液”字指固定相是液体。例如在惰性材料硅藻土涂上一层角鲨烷，可以分离、测定纯乙烯中的微量甲烷、乙炔、丙烯、丙烷等杂质。 原理： 气相色谱的流动相为惰性气体，气-固色谱法中以表面积大且具有一定活性的吸附剂作为固定相。当多组分的混合样品进入色谱柱后，由于吸附剂对每个组分的吸附力不同，经过一定时间后，各组分在色谱柱中的运行速度也就不同。吸附力弱的组分容易被解吸下来，最先离开色谱柱进入检测器，而吸附力最强的组分最不容易被解吸下来，因此最后离开色谱柱。如此，各组分得以在色谱柱中彼此分离，顺序进入检测器中被检测、记录下来。 气相色谱法是指用气体作为流动相的色谱法。由于样品在气相中传递速度快，因此样品组分在流动相和固定相之间可以瞬间地达到平衡。另外加上可选作固定相的物质很多，因此气相色谱法是一个分析速度快和分离效率高的分离分析方法。近年来采用高灵敏选择性检测器，使得它又具有分析灵敏度高、应用范围广等优点。 乙醇分析中，常用的色谱柱是填充柱，填料可以是多孔性颗粒吸附剂或均匀地涂敷了一层很薄固体液膜的惰性载体，载气多为惰性气体，检测器多用氢火焰离子化检测器（flame ionization detectou,FID）。 优缺点： 优点在于，对已知范围的多组分混合物进行一次测定，可同时得到一个组分的定性和定量分析。 缺点在于很难分析未知物，如果没有已知的纯品与之相对照，就很难判断某一色谱峰究竟代表什么物质。另外，定性分析时，也有干扰，因为不同的物质可以有相同的保留时间。更重要的是，血液蛋白会阻塞色谱柱的小孔和加样器的针头，以致缩短色谱柱的使用寿命。 20世纪70年代到现在，国外法医学实验室中逐渐用顶空气相色谱（Headspace Gas Chromatography,HS_GC）取代其他血液乙醇分析方法，这是一种分析有机挥发物的理想方法。通常先用内部标准源———异丙醇稀释血液样品，调节气体净化器，待载气的流量、温度及基线稳定后，将液态混合物用微量加样器注入汽化室，在汽化室瞬间汽化的样品在载气带动下，就进入色谱柱，以下同气相色谱法。作为有大量样本中的常规检测，这种方法迅速而有效。 发展： 20世纪80年代中期发展起来的色谱与质谱或光谱的联用技术，如气