《基于ITS2序列鉴定中药材金沸草、旋覆花及其近缘混伪品》.pdfVIP

2014 第十六卷 第二期 trVo1．16No．2 基于ITS2序列鉴定中药材金沸草、旋覆花 及其近缘混伪 品六 郭力城 一，胡志刚 ， ，涂 媛 一，张卫东 ，金慧子 ，孙 伟 。， 贺海波 ，马孝熙s，黄必胜 (1．湖北中医药大学药学院 武汉 430065；2．广西民族医药研究院 南宁 530001； 3．中国中医科学院中药研究所 北京 100700；4．上海交通大学药学院 上海 200240) 摘 要：目的：应用 ITS2序列鉴定中药材金沸草、旋覆花及其近缘种混伪品，以确保药材质量，保障 临床安全用药。方法：通过对金沸草、旋覆花等药材的3个基原物种条叶旋覆花、旋覆花和欧亚旋覆花及 其同属近缘物种进行DNA提取、PCR扩增 ITS2序列并双向测序 ，用CodonCodeAligner对测序峰 图进行 拼接后 ，用MEGA5．0软件进行相关数据分析，并构建NJ系统聚类树以直观反映鉴定结果。结果：各基原 物种 ITS2序列变异位点稳定，其种 内平均 K2P距离均远小于各 自药材 以及 同属近缘混伪品的种间平均 K2P距离；基于ITS2序列的NJ树可以将金沸草和旋覆花药材与同属其它近缘混伪品明显区分开。结论： ITS2序列可准确鉴别中药材金沸草和旋覆花及其同属近缘混伪品。 关键词：金沸草 旋覆花 ITS2序列 鉴定 近缘物种 doi：10．11842／wst．2014．02．017 中图分类号 ：R284．1 文献标识码 ：A 金沸草为菊科植物条叶旋覆花 Inulalinarifiolia 售品混淆现象，影响了用药安全和准确。目前国内 Turez．或旋覆花 ，．japonicaThunb．的干燥地上部 外关于金沸草 、旋覆花的鉴别研究 ，仅见性状鉴别 分 ；旋覆花为菊科植物旋覆花 ，_aponicaThunb．或 和显微鉴别等l6．。 欧亚旋覆花 ，．britannicaL．的干燥头状花序_l1。广布 随着分子生物学技术的飞速发展 ，中药DNA分 于全国各地 ，生于山坡、荒地、路旁、河岸等地。旋覆 子鉴定经历了以RFLP、RAPD和DNA条形码 (DNA 花药用历史悠久 ，其别名繁多，使用最广泛 的名称 bareoding)技术为代表的 3个阶段 8【I，应用 DNA条 为旋覆花与金沸草2【】。金沸草和旋覆花为 《中国药 形码技术对物种进行鉴定和分类 已逐渐成为生物 典》(2010年版)收录的常用中药，具有降气 、消痰、 分类学的研究热点[1o，“]。中药 DNA条形码鉴定研究 行水等功效。现代药理研究表明，金沸草具有抗肿 是以ITS2为主体条形码序列鉴定中药材 的方法体 瘤、抗炎、抗真菌等多种生物活性3『~。我国有 2O余 系，能够实现对中药材及其基原物种的准确鉴定ll2】。 种旋覆花属植物 ，多种植物常供药用 ，除金沸草和 ITS2条形码的鉴定能力已经得到了研究者的广泛 旋覆花药材共 3种正品来源外 ，该属相关物种由于 认可[t3~181。陈士林等 研究发现 ITS2序列在物种水 植物形态及药材性状相似，许多地区也将旋覆花属 平具有较高的鉴定效率。ITS2序列的优点不仅在于 其他物种误作为金沸草或旋覆花入药，因此常见市 其序列长度较短 ，扩增和测序比较容易，适于部分 DNA降解的中药材样品扩增，还可以实现对中药材 收稿 日期 ：2014—02—07 基原物种 、粉末以及细胞、组织等材料来源的准确 修 回 日期 ：2014—02—19 ★ 国家自然科学基金委青年科学基金项 目：新型抗 自身免疫性心肌炎倍半萜类成分的发现及机制研究，负责人：金慧子。 ★★ 通讯作者：胡志刚，博士，讲师，主要研究方向：中药资源与中药分子鉴定；黄必胜，教授 ，博士生导师，主要研究方向：中药资源学。 307 [0rfdScienceandTechnology~Modernizationo