底物流加策略对发酵法生产1，3-丙二醇的影响.pdfVIP

维普资讯 底物流加策略对发酵法生产 1，3．丙二醇的影响 程可可 孙 燕 刘卫斌 刘德华 (清华大学化学工程系，北京，100084) 摘 要 研究了以甘油为底物，由克雷伯 氏菌(Klebsiell口pne“monroe)生产 1。3一丙二醇的流加发酵 中底物的不同流加策略(如甘油反馈连续流加、脉冲流加、恒速流加、甘油一碱耦合流加、改进的甘油 一 碱耦合流加)对发酵的影响。研究表明，采用改进的甘油一碱耦合流加策略，即甘油一碱耦合流加同 甘油恒速流加相结合的流加策略，能够有效地控制发酵体系中甘油浓度，当发酵进行至 50h时。 1，3一丙二醇浓度可达54g／L，生产强度为 1．08g／(L·h)。明显优于其他流加策略下1，3一丙二醇的发 酵结果。 关键词 KlebsiellapneumoniaP，1，3一丙二醇，流加策略 1，3一丙二醇 (1，3propanediol，简称 PDO)， 主要有以下 2条解决途径 ：(1)是通过基因或诱 是一种重要 的化工原料，可应用于油墨、涂料 、 变手段筛选能耐高甘油底物的生产菌株；(2)是 抗冻剂、保护剂 以及医药等行业…。最近的研 采取连续发酵l4J、流加发酵 5等生产工艺来消 究表明，以 1，3一丙二醇与对苯二 甲酸为单体合 除底物抑制对发酵的影响。从 目前的研究结果 成的聚合物聚对苯二 甲酸丙二醇酯(PTT)比以 来看，采用流加发酵工艺对底物抑制的改善效 乙二醇和对苯二 甲酸为单体形成的聚合物—— 果更为显著，因此，开发一种简单、高效的流加 聚对苯二甲酸乙二醇酯 (PET)更具 良好特性， 工艺变得更为重要，基于此 目的，文中就甘油反 因而PDO在纺织、地毯以及工程塑料领域也具 馈连续流加、脉冲流加和 pH值响应流加等不 有非常广阔的应用前景。现行的PDO生产路 同流加方式对生物量以及PDO浓度和产率的 线主要是丙烯醛法和环氧乙烷法，两者都存在 影响进行了研究。 工艺复杂、条件苛刻和环境污染等问题。因此 1 实验材料与方法 利用具有条件温和、原材料来源广泛、环境污染 小等优点的微生物发酵法生产 1，3．丙二醇，已 1．1 实验材料 成为近年来研究的热点 2【J。然而相 比于化学 实验所用菌种为中国农业大学赠送的克雷 法合成 1，3一丙二醇的价格，微生物发酵法 目前 伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)，其培养基组成 并没有明显的成本优势，其主要原因是发酵液 成分[6--8]见表 1。 中产品浓度和发酵强度低，从而使生产成本相 1．2 实验方法 对较高，对取得更大的经济效益 尚存障碍，因 1．2．1 培养条件 此，开发提高PDO发酵液中产品浓度及生产强 将于甘油管保藏的菌种转接至 IB斜面， 度的工艺成为该领域研究的重点。 30℃下活化 12h。种子培养采用有氧培养，使 文献报道，在批次发酵体系中，当初始甘油 用 500mI三角瓶，装液量 100mI。培养温度 浓度高于50g／I时，菌体生长就会受到一定的 30℃，摇床转速 140r／min。流加发酵实验在德 抑制_3J，而选择较低的初始甘油浓度时，发酵 国产BiostatB型 5I全 自控发酵罐中进行，装 液中产品浓度相应较低。针对这一特点，目前 液量 4I，接种量 10％。发酵温度 37℃，通入 第一作者：博士研究生(刘德华教授为本文通讯作者)。 *“十五”国家科技攻关计划项 目(No．2001BA708B01—04) 收稿时间：2003—12—26