...菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢,产孢子越来越少； ....pptVIP

几种常用菌种保藏方法的比较 * 衰退的原因：①基因突变 ②分离现象 常见的衰退现象： 菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 代谢产物生产能力下降； 第五节 菌种的衰退、复壮及保藏 一、菌种的衰退与复壮 1. 衰退（degeneration） 菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象。 ①控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率是5×10-4，自发突变的频率为10-8~10-9，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的次数）；  ②创造合适的培养条件；  ③采用不易衰退的细胞进行传代（对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种）；  ④采用有效的菌种保藏方法。 防止菌种衰退的方法 致病菌对宿主侵染能力下降； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种。 2、 菌种的复壮（rejuvenation） ①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。 ②通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复壮）； ③淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。④采用有效的菌种保藏方法。 菌种的复壮措施 二、菌种保藏 ①存活，不丢失，不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种 选用优良的纯种（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等） 1. 目的： 2. 原理： 广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 3. 国内外菌种保藏机构 菌种保藏机构的任务 菌种保藏机构 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） 连续在培养基上（内）移种 连续在活宿主上（内）移种 滴入小试管 菌液直接干燥 冷冻真空干燥法液氮保藏法 封入安瓿 土壤 砂粒 土壤＋砂粒 硅胶 磁球 曲料 麦粒 棉纤维 滤纸片 明胶小片 血清蛋白小片 薄片状载体 细粒状载体 球块状载体 有机基质 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上 固体斜面 半固体琼脂柱 液体介质（蒸馏水、糖液、甘油、其它悬液） 干法 湿法 生活态 传代培养保藏法 休眠态 4.菌种保藏的方法 石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 干燥保藏法将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。 真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。 液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法 简便 简便 简便 简便有效 简便有效 3~6月 6~12月 1~2年 1~10年 5~15年以上 各大类 细菌、酵母菌 各大类** 产孢子微生物 各大类 低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养 干燥、无氧、低温、有保护剂 冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体） 石蜡油封藏法* 沙土保藏法 冷冻干燥法 评价 保藏期 适宜菌种 主要措施 方法名称 * * *