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冯洁 等/重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor 的原核表达、纯化及活性鉴定 1607
生 物 工 程 学 报
Chinese Journal of Biotechnology November 25, 2012, 29(11): 1607−1616
/cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved
医学与免疫生物技术
重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor Kazal 结构
域的原核表达、纯化及活性鉴定
1, 2 1 3 3 3 3 3 1 1
冯洁 ，伦永志 ，李越 ，武会娟 ，李宝明 ，魏玲 ，张小莉 ，王雪蕾 ，迟庆
1 大连大学医学院 辽宁省高校生物物理学重点实验室，辽宁 大连 116622
2 大连大学生命科学与技术学院，辽宁 大连 116622
3 北京市理化分析测试中心，北京 100094
冯洁, 伦永志, 李越, 等. 重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor Kazal 结构域的原核表达、纯化及活性鉴定. 生物工
程学报, 2013, 29(11): 1607−1616.
Feng J, Lun YZ, Li Y, et al. Prokaryotic expression, purification and activity analysis of recombinant human serine protease
inhibitor Hespintor Kazal Domain. Chin J Biotech, 2013, 29(11): 1607−1616.
摘 要: Hespintor 是应用抑制消减杂交技术 (SSH) 从肝母细胞瘤细胞系 HepG2 中筛选得到的一未知功能
蛋白，序列分析表明该蛋白属于 Kazal 型丝氨酸蛋白酶抑制因子 (Serine proteinase inhibitor, Serpin) 家族
中的一个分泌型新成员，具有与食管癌相关基因2 (Esophageal cancer related gene 2, ECRG2) 高度同源的
Serpin 基本结构。为了进一步阐明Hespintor 的生物学功能，必须得到纯化的Hespintor 蛋白。先将 Hespintor
Kazal 结构域编码序列亚克隆至原核表达载体 pET-40b(+) ，转化至 Rosetta (DE3) 表达宿主菌中。经
0.25 mmol/L IPTG ，30 ℃诱导 5 h 获得了分子量约为 42 kDa 的Hespintor-Kazal 重组融合蛋白的优化表达，
Western blotting 证实了重组蛋白的特异性。Hespintor-Kazal 重组融合蛋白以包涵体形式在宿主菌中表达，
利用金属螯合亲和层析和阴离子交换层析柱对重组蛋白进行两步纯化。初步的活性鉴定表明，纯化的
Hespintor-Kazal 重组融合蛋白能特异性抑制胰蛋白酶的水解活性，提示 Hespintor 具有作为一种新型抗肿
瘤药物的潜在开发价值。
关键词: 丝氨酸蛋白酶抑制因子, Hespintor, Kazal 结构域, 原核表达
Received: January 8, 2013; Accepted: June 17, 2013
Supported by: Dalian Science and Technology Planning Project (No. 2010E13SF138).
Corresponding author: Yongzhi Lun. Tel: +86-411 E-mail: lunyz@163.com
大连市科技计划项目 (No. 2010E13SF138
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