实验三 血清γ-球蛋白分离、纯化与鉴定(七年制).ppt

血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定 一、盐析法粗分离血清γ-球蛋白 盐析法 定义：加入大量中性盐以破坏蛋白质的稳定因素并使从溶液中沉淀析出的现象。 原理: 破坏蛋白质两个稳定因素： 水化膜和电荷层 中性盐：(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等。 优点：蛋白质不变性，常用。 二、葡聚糖凝胶柱层析脱盐 凝胶柱层析脱盐 ▲ 加样与洗脱 ▲ 凝胶的再生 ⑤.层析后洗脱液检测 白色比色板,洗净备用。 一块在各孔滴加奈氏试剂（检测NH4+）,另一块滴加20%璜基水杨酸（检测蛋白质）。 不用滴管,避免污染,直接倒… 用“-”表示无现象，用“+”, “++”, “+++”等表示颜色深浅 三、DEAE－纤维素离子交换层析 离子交换层析的基本原理 DEAE－纤维素离子交换层析纯化γ－球蛋白 操 作 四、γ－球蛋白纯化液的浓缩 五、γ－球蛋白鉴定 蛋白质的电离示意图 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定 醋酸纤维素薄膜电泳 操作步骤： 1、装置电泳箱。区分电泳箱正负极 。 2、点样：浸于巴比妥溶液中的薄膜，滤纸轻轻吸 干 — 半干燥态。 铅笔标记；点样器沾适量新鲜血清，垂直点样。 3、放入电泳槽，使膜保持水平。 4、通电：110伏，1小时。断电后，取膜。 5、染色：氨基黑10B染色5min。 6、漂洗：漂洗液浸洗3次，每次5-10min。 按泳动快慢顺序分为：清蛋白、