叠氮基修饰大鼠血栓调节蛋白表达活性测定.pdf

·中文论著摘要· 叠氦基修饰的大鼠血栓调节蛋白的表达及活性测定 目 的 氨基酸决定了蛋白质自身的结构和活性，通过对一些天然氨基酸的化学修饰， 将独特的化学基团引入蛋白，对于蛋白功能及活性具有很大影响。血栓调节蛋白 活泼的叠氮基团引入TM，可以进一步的发挥其优势作用。本实验旨在以pET-28a(+) 质粒为表达载体，构建含有重组质粒的E．coli B834(DE3)菌株，诱导表达叠氮基修 饰的大鼠血栓调节蛋白，并对其进行纯化和活性测定。 方法 1、蛋氨酸类似物2一氨基一4一叠氮丁酸(AlIA)合成 首先以L一蛋氨酸为起始原料经硫甲基化、水解合成L一2一氨基一4一羟基丁酸， 然后经溴代开环、成酯、叠氮化、水解四步反应得到目标产物。经纯化重结晶、 干燥后，室温密封待用。 2、质粒的提取及转化 coli 复苏菌株E BL21(DE3)，提取质粒，并测序鉴定其DNA序列，将测序 coli 正确的质粒转化E B83