正交设计优化青贮玉米自交系ISSR-PCR反应体系.pdfVIP

第34卷第9期2015年9月 种 子 (Seed) V01．34No．9Sep．2015 正交设计优化青贮玉米自交系ISSR—PCR反应体系 柴 华1， 孙静2。 曹立军1， 张梅娟2， 沙伟2 (1．黑龙江省畜牧研究所，齐齐哈尔161005， 2．齐齐哈尔大学生命科学与农林学院， 黑龙江齐齐哈尔161006) on forISSR—PCRReaction of StudyOptimization System MaizeInbredLine Silage CHAIHual，SUN Wei2 Lijunl，ZHANGMeijuan2，SHA Jin92，CAO 摘 要：以青贮玉米自交系为材料，利用正交试验设计，对其 ISSR PCR反应体系中的模板DNA量、Mg”、引物、dNTPs、 物浓度、Taq酶及引物退火温度等，对于不同的反应 T“q酶量等j个因素在4个水平上进行体系优化，确定出青贮 体系和扩增程序，ISSR的结果是不同的]。本研究主 70 玉米自交系ISSR—PCR反应的最佳体系为：模板DNAng、 要针对ISSR反应体系的5个因素在4个水平上对黑 M92+浓度2．00mmol／L、引物浓度0．60“mol／L、dNTPs浓度 龙江省畜牧研究所自主选育的青贮玉米自交系进行 0．20 U，反应体积为20“I。。利用该最 mmol／I—Taq酶量1．25 PCR体系优化，建立适合于青贮玉米自交系的ISSR— 佳体系，选取引物825对16份材料进行扩增，以验证该体系的 稳定性。青贮玉米自交系这一优化体系的建立，为今后利用 ISSR标记技术开展青贮玉米自交系遗传多样性分析提供了科 技术为青贮玉米种质鉴定、遗传关系、新品种选育及杂 学依据。 交亲本的选择提供理论依据∞。6。。 关键词：正交设计；ISSRPCR；体系优化；自交系 1材料与方法 D01编码：10．16j90／i．cnki．1001—4705．2015．09．102 1．1实验材料 中图分类号：S513 文献标志码：A 采用黑龙江省畜牧研究所自主选育的16份青贮 文章编号： 100卜4705(2015)09—0102一04 玉米自交系为供试材料(见表1)，种子置于花盆中培 玉米在全世界是重要的粮食作物和饲用植物，目 养，长成幼苗后取其叶片，清水洗净，放入一80℃冰箱 前种植面积仅次于水稻和小麦居第3位¨]。近年来， 中保存[8]，其中以自交系132为正交试验材料，提取其 我国玉米育种工作取得了很大的成效，培育出了优质、 总DNA为PCR反应模板。 高产、抗逆、抗病虫、适合不同地区种植的玉米新品种， 1 表1 6份供试实验材料 大大促进了我国玉米生产的发展。随着我国农业种植 结构调整力度的加大及畜牧业的快速发展，针对优质 饲草饲料缺乏的局