陆棉抗旱相关基因(GhTrx、GhGR)克隆与功能分析.pdf

摘要 干旱严重影响棉花产量和品质，20世纪80年代以来我国棉花旱情有加重的趋势， 每年应旱灾减产的棉花总量达到30％以上。特别在棉花主产区新疆，干旱乃是限制其产 量的主要因素。干旱对棉花产量的影响在各种非生物的环境胁迫因子中占首位，仅次于 生物胁迫即病虫害所造成的损失。干旱直接影响棉花正常代谢和生长发育；干旱导致棉 花细胞脱水，膜系统和酶系统遭到破坏，使细胞功能丧失，最终导致植株的代谢紊乱， 进而引起蛋白合成受阻，激素平衡破坏。因此，通过分子生物学手段研究棉花抗旱基因 及作用机制，从而提高棉花抗旱能力，培育抗旱品种已成为重要的课题。 因做了抗旱相关性表达分析，并通过GFP对其基因亚细胞定位，拟南芥农杆菌转化技 术和基因枪活体转化技术对2个基因功能做了进一步研究分析。 cDNA全长1340bp，它包括5-UTR191bp，完整开放阅读框864bp，3-UTR285bp，编 122bp， 完整开放阅读框792bp和3-UTR121bp，编码263个氨基酸残基的多肽。 生物信息学分析表明，GhTrx基因编码蛋白与杨树、蓖麻、拟南芥的相似性分别为 结构域预测表明该基因有3个保守结构域，二级结构预测表 明，该蛋白是由a．螺旋、D．折叠、转角和无规则卷曲组成。GhGR蛋白与氨基酸序列比 对和同源性分析显示该基因与杨树、蓖麻、葡萄同源性最高，分别90％、91％和91％。 系统发育树结果显示，GhGR与葡萄中该蛋白的亲缘关系最近。跨膜结构域分析表明， 该基因有1个跨膜结构域。 在抗旱材料中H177不同的组织和不同干旱处理时期材料，进行Real．timePCR分 析。结果表明，干旱胁迫下，GhTrx和GhGR基因在干旱材料的根、茎和叶中受到诱导 表达，且在根和叶中2个基因的表达量高于茎中。由此可推测该基因在干旱胁迫时，根、 茎和叶中能进行大量表达以抵抗外界的干旱威胁，但根和叶部该基因的表达对应对干旱 逆境胁迫起着关键性的作用，有实验可知GhTrx和GhGR基因可能在提高陆地棉抗旱性 上发挥一定作用。 发现GhTrx蛋白定位于洋葱的细胞膜上，GhGR蛋白可能定为在细胞核和细胞膜上。 拟南芥种子，进行抗旱性分析结果表明，转基因的植株能提高拟南芥的抗旱性，由实验 可知陆地棉的GhTrx基因的超量表达能提高拟南芥的抗旱性。 因在棉花中的抗旱性功能分析奠定了基础。 关键词：陆地棉，干旱胁迫，RACE，亚细胞定位，真核表达 II ABSTRACT themainfacter cottonand been a Drought，as yield qualit)r，hasgrowingtranendency influencing elementsofcoRoninChinasince1 amountsofcoUonhas decreasing 980s．Everyyear，theproduction reducedmorethan30％for in maincoRon by drought，especiallyXinjiangprovince，the producingregion，， hasbeenthemain limitcoRon the factortOaffect where factorto drought production．Drought，askey coaon inallkindsof constraintsissecondtothe stresscaused and output biological only biological bypest thenormalmetabolismofcoRon and