人类GV期不成熟卵母细胞体外培养的研究.pdfVIP

博{‘论文 人类GV期不成熟卵母细胞体外培养的研究 博士研究生 艾继辉 导 师 罗丽兰教授 中文摘要 l ／人类和绝大多数哺乳动物在胍胎期或刚山生时，卵母细胞即丌始减 数分裂，第一次减数分裂停留于双线期(diplotene)，其内可见明显的胚泡 vesicle．GV)。当将卵泡中GV期卵母细胞移至体外培养，可自 (germinal 发性地恢复减数分裂发育至MII期。本课题研究FF、EGF、卵丘颗粒细 vitro 胞(也称卵丘细胞)对人类不成熟卵母细胞体外成熟(in maturation， IVM)的影响，探索IVM的最佳培养条件；并通过采集不同年龄及不同 月经周期妇女的不成熟卵母细胞进行体外培养，以探讨年龄和月经周期 时相对不粤拳§￡吵细胞质量及其1VM的影响。为1VM技术的临床应用 提供参考。1 本研究共分三个部分： 一、 诱发排卵前成熟卵泡之卵泡液对卵母细胞1VM的影响 f103个不成熟卵丘卵母细胞复合物采白26例正常足月妊娠行剖宫产 1 H 17 +0．075Iu／mlHMG+0．5IuJmlHCG+10一E，十15％FCS，III组 g／ml 倍倒置显微镜上观察细胞核及第一极体排出情况，并记录。48～52小时 后将所有达到MIl期卵母细胞用常舭体外受精方法进行受精，受精后培 阳济医科大学 博{‘论支 养3天，每24小时观察并记录受精和卵裂情况一次。 vesicle breakdown，GVBD) 结果I、II、III组的生殖泡破裂(germinal 率分别为82．4％、85．3％$11 62．9％，三组之间差异无显著。tC(po．05)。M II期率三组分别为64．7％、70．6％、28．6％，I、11组明显高于III组(po，01)， I组与II组之间无差异(pO05)。受精率三组分别为：I组72．7％、II组 50．0％、111组30．0％，I组与II组明显高于111组(I：111 p0．叭，II：III p0．05)：I组与II组之间无差异(p0．05)。I组卵裂至8细胞胚泡的比例 ／、 卵母细胞的成熟，两者相比，50％FF效果更好。J t 二、 EGF、卵丘细胞对卵母细胞IVM的影响 ／从35例正常足月妊娠行剖宫产孕妇的卵巢上采得不成熟卵母细胞 ＼ 137个，分两组，CEO组(n=77)：被卵丘颗粒细胞致密包裹的卵母细胞 组，DO组(n=60)：除去卵丘颗粒细胞的裸卵组。培养液分两种：EGF(+)： M1 EGF+0．0751u／mlHMG+O．51u／mlHCG+lu 713- 99+2ng／ml g／mlI ug／mtl7 B—E，+0．3％BSA即Gn培养液。卵母细胞的培养及受精方法同第一部分． 观察指标也同第…部分。 Il期率、受精率、卵裂率(卵 结果：DO组：EGF(一)组GVBD率、M 裂至／2细胞胚泡占全部受精卵