乳糖酶固定化及生产低乳糖羊奶实验的研究.pdfVIP

乳糖酶的固定化及其生产低乳糖羊奶的实验研究 生物物理学专业 研究生顾新玲 指导教师杨建雄教授 摘要：本项研究的主要目的在于利用B一半乳糖苷酶水解羊奶中的乳糖来解决一直 困扰乳制品消费和生产的乳糖不耐症。 固定化酶是20世纪60年代开始发展起来的一项新技术，是指经物理或化学方 法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。 目前己建立的固定化方法分为载体结合法、包埋法及交联法三类。它比游离酶具 有多方面的技术优点，正在被人们所接受，并逐步应用于我国的国民经济建设中。 固定化酶与游离酶相比，具有下列优点：①极易将固定化酶与底物、产物分开：② 可以在较长时间内进行反复分批反应和装柱连续反应：③在大多数情况下，能够 提高酶的稳定性：④酶反应过程能够加以严格控制；⑤产物溶液中没有酶的残 留，简化了提纯工艺：⑥较游离酶更适合于多酶反应：⑦可以增加产物的收率， 提高产物的质量；⑧酶的使用效率提高，成本降低。 在我国有许多人无法消化和吸收乳糖，主要是因为其肠内乳糖酶的活性随着 年龄的增长日益降低的结果。为了扩大乳制品的生产和消费，生产一种为广大群 众都可接受的新型乳品饮料是非常必要的。低乳糖乳品饮料不仅较普通羊奶更有 营养，而且还能够解决乳糖不耐症，同时羊奶经乳糖酶水解后，增加了羊奶的滋 味，明显提高了羊奶的香味，同时强化了多种微量元素和生长因子，大大满足了 患有轻重程度不同的乳糖不耐症人群对羊奶的需求。低乳糖营养乳与普通的羊奶 相比营养更全面，所以也适合各种人群，特别是儿童和老人饮用．因此，水解羊 奶中的乳糖有非常重要的意义，低乳糖羊奶有更加广泛的市场前景。 乳糖酶广泛存在于各种动植物以及微生物中，包括B一半乳糖苷酶 作用．一般说来，用于生产低乳糖奶的乳糖酶即是13一半乳糖苷酶，它能将乳糖分 解为葡萄糖和半乳糖。在众多来源的0一半乳糖苷酶中，特别要说明的是E．耐萨 生的B一半乳糖苷酶，由于其亚基结构、一级结构及空间结构已经被确定，因此对 B～半乳糖苷酶酶解机理的研究主要基于此酶．B一半乳糖苷酶的相对分子质量为 460kD，具有四聚体结构，由4个相对分子质量各为116kD的多肽链组成。 本实验用海藻酸钙(海藻酸钠2％，CaCl：2％)为载体，包埋法制备颗粒状的 固定化B一半乳糖苷酶，然后。用水溶性壳聚糖(1％)处理固定化B一半乳糖苷 酶颗粒以更好地防止酶的泄漏，同时，壳聚糖也可以作为一种吸附剂强化对酶的 固定化作用。本文主要研究了游离B一半乳糖苷酶与固定化B一半乳糖苷酶对原料 奶中乳糖的水解率，并对用游离B一半乳糖苷酶与固定化B一半乳糖苷生产低乳糖 羊奶的相关技术进行了实验室规模的研究。结果表明：游离酶的最适温为390，最 适温度为45C，最适pH值为6．8，与游离酶相比较，热稳定性及pH稳定性都有了 71．5％，经初步重复 明显的提高，45℃下，加酶量29，水解3．oh，乳糖水解率达NT 使用20次．酶活力为起始活力的80％．并且将水解后的低乳糖羊奶在70C，80C， 90℃，10012下保温30min后，羊奶的性状保持完好，这为工业化生产低乳糖羊奶 提供了较好的实验依据。 关键词：B一半乳糖苷酶，固定化酶，乳糖不耐症 Ⅱ Immobilizationof and of B·galactosidasestudyproducing milkit low-lactose sheep’Sby MajortBiophysics XiIl Advisor：YANGJian Postgraduate：GULing Xiong this wasto low—lactosemilk