杂色曲霉素对食管鳞状上皮细胞影响实验及研究.pdf

中文摘要 杂色曲霉素对食管鳞状上皮细胞影响的实验研究 摘 要 ST)是致癌性真菌毒素，是 目的：杂色曲霉素(sterigmatocystin， 我国食管癌高发区居民饮食中的主要污染真菌毒素之一。本研究室以往研 究发现，采用河北省太行山区居民正在使用的酸菜汤样品、杂色曲霉菌素 污染的玉米面以及纯化的杂色曲霉素灌胃的动物诱癌实验研究中，可以见 到肺腺癌和胃不典型增生，但均未发现诱发食管癌。杂色曲霉素作为食管 癌的病因尚缺乏足够的证据。 机体的免疫功能状态是影响肿瘤发生的一个重要因素，恶变细胞可通 过多种机制逃避机体的免疫监视，使机体的免疫系统出现障碍而无法对肿 瘤细胞进行识别和杀伤。本研究室以往研究证实，ST可诱导人外周血单 核细胞(human bloodmononuclear peripheral 呈正相关，对咖BMc细胞表面HLA．1分子表达呈剂量依赖性下降。 有研究发现我国食管癌高发区食管癌组织与正常组织相比，HLA．I 表达下降，并且HLA—I的下调与病理分级、淋巴转移等呈正相关。为了 从免疫方面进一步探讨ST在食管癌发生中的可能作用，进行了以下实验： 1应用细胞培养、免疫组化、流式细胞术方法研究了ST对体外培养 的人食管鳞状上皮细胞HLA．I表达的影响。 2为探讨ST处理食管鳞状上皮HLA—I表达影响的可能机制用细胞 培养、Wreston 食管鳞状上皮细胞TAPl、LMP2表达的影响。 3为探讨食管异常情况下，ST对食管鳞状上皮致癌的可能作用，应 用病理观察、免疫组化和原位杂交的方法研究了ST处理反流性食管炎大 方法： 1人食管鳞状上皮细胞的培养 中文摘要 26例责门癌患者，距离癌组织3～5cm，取正常食管粘膜。经组织病 理证实为正常食管粘膜的组织进行细胞培养。培养的方法采用组织块法。 基，37℃，5％C02培养。待细胞铺满瓶底的70％～80％，收集细胞做常规 HE染色，观察细胞形态，同时做角蛋白抗体和波形蛋白抗体免疫组化， 对细胞性质进行鉴定。 2杂色曲霉素对人食管鳞状上皮细胞HLA．I表达的影响 培养的细胞随机分为7组，一组为空白对照，一组为溶媒对照：其余 5组分别加入终浓度为2．Omg／L、1．Omg／L、O．5mg／L、O．25mg／L、O．125mg／ 的ST，继续培养24小时，Hanl(’s液洗细胞2次，加入完全新鲜培养基 继续培养24小时，Hank’s液洗细胞2次，收集细胞，一部分用95％乙 醇固定做免疫组化，另一部分70％乙醇固定做流式细胞定量分析。 。 3杂色曲霉素对人食管鳞状上皮细胞TAPl与LMP2基因的影响 培养的细胞随机分为7组，一组为空白对照，一组为溶媒对照；其余 5组分别加入终浓度为2．Omg／L、1．Omg／L、O．5mg／L、O．25mg／L、O．125mg／ 的ST，继续培养24小时，Hank’s液洗细胞2次，加入完全新鲜培养基 取细胞总RNA。应用半定量RT．PCR方法检测体外培养的人食管上皮细 胞TAPl和LMP2 mRNA表达情况，并应用westonblot方法测定TAPl和 LMP2蛋白表达的情况。 4ST处理反流性食管炎大鼠模型对食管鳞状上皮的影响 30只4周龄Wistar大鼠，术前术后禁食24小时，不禁水，1O％水合 氯醛麻醉。采用责门括约肌部分切除术和贲门括约肌部分切除术加幽门半 结扎术制备反流性食管炎模型。对照组行伪手术。处理组术后7天给予腹 r g u 腔注射杂色曲霉素30g／l(g，连续7天。对照组和模型组术后7天给予腹 _。 腔注射同等量生理盐水，连续7天。分别于ST