《人GITRL和IL-21基因对CML来源树突状细胞功能的影响.》.pdfVIP

熊 彬等 人 GITRL和 IL-21基因对 CML来源树突状细胞功能的影响 第 9期 doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．09．010 人 GITRL和 IL．21基因对 CML来源树突状细胞功能的影响① 熊 彬 金七妹 宋飞雪 (兰州大学第二医院肿瘤科，兰州 730030) 中图分类号 R733．72 文献标志码 A 文章编号 1000-484X(2014)09-1189-06 [摘 要] 目的：本研究构建人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(GITRL)联合白细胞介素21(IL-21)基因真核 表达载体 ，为探讨 目的基因对慢性粒细胞白血病 (CML)来源树突状细胞 (DC)的影响。方法：脂质体介导法将重组真核表达 载体转染经纯化的伊马替尼治疗有效、无效的慢性期CML患者及健康志愿者来源的DC，流式细胞仪检测转染后DC的CD1a、 CD83、CD86表达率变化。将转染后的DC与纯化的自体NK混合培养使之成为DC．CIK。以DC—CIK细胞为效应细胞 ，乳酸脱 氢酶释放法观察其对靶细胞的杀伤率。结果：所获目的基因经测序与GenBank比对序列一致，真核表达载体质粒经限制性酶 切鉴定片段大小正确，并均可转染至伊马替尼治疗有效、无效的慢性期 CML患者及健康志愿者来源的DC细胞。经转染DC 的CD1a、CD83、CD86表达率增加，细胞毒活性试验表明转染后的DC可增加 自体 NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结论：各 组DC能够通过转染 IL一21和GITRL基因的方式获得 自我活化 、上调 自身细胞表面分子的表达，增强其对肿瘤细胞的细胞毒 活性 。 [关键词] IL一21；GITRL；树突状细胞；NK细胞；免疫治疗 Effect of GITRL and IL-21 gene on chronic myeloid leukemia derived dendriticcell XIONGBin。jlNQi—Mei，SONGFei—Xue．OncologyDepartment．SecondHospitalofLanzhouUniversity，Lanzhou 730030，China [Abstract] Objective：Toconstructtheeukaryoticexpressionvectorcarryingglucocorticoid．inducedtumornecrosisfactor receptorligand(GITRL)andinterleukin一21(IL-21)genefortransfectionintochronicmyeloidleukemia(CML)deriveddendriticcell (DC)，whichprovidesaneffectiveplatformofrexploringthefunctionoftargetgeneinCML．Methods：Therecombinanteukaryoticex— pressionvectorwastransfectedthepurifiedDCbyLiposome—mediatedmethod．ThesurfacemolecularexpressionoftransfectedDCwas analyzedbyFlow Cytometry．Further，wemixedculturethetransfectedDC withpurified NK tobe DC—CIK，lactatedehydrogenase releaseassaywasperformedtomeasurethekillingactivityofDC—CIK．Results：Thesequenceofclonedtargetgenewassameasthatin GenBank．Thesizeofendonucleaseproductsbyrestrictionenzymewassameasthepredictone．Thesurfacemolecularexpressionand cytokinesecretionwereallincreasedintransfectedDC．ThekillingactivityofNK becamestrongerwhileinducedbytransfectedDC． Conclusion：DCtransfected byIL·21and GITRL genehastheabilitytoserf-active，up—regulatecytokine secretion．More