《人冠状病毒HCoV-HKU1环介导等温扩增检测技术的研究.》.pdfVIP

生垦虽境卫生 瘴杂志2014年8月第37卷第4期 ChineseFrontierHealtll ·217 · · 实验 研 究与疾病 监测 · 人冠状病毒HCoV—HKU1环介导等温扩增 检测技术的研究 刘胜牙 ，朱玉兰 ，胡孔新 ，谢聪贤 ，甄胜西 ，徐媛 1．深圳 国际旅行卫生保健 中心，广东 深圳 518033；2．中国检验检疫科学研究院 摘要：目的 建立一种快速、灵敏、高效的人冠状病毒HKU1(HCoV—HKU1)LAMP扩增检测方法。方法 应用生物信 息学软件设计 5套 LAMP扩增引物 ，以合成的HCoV—HKU1质粒为模板 ，通过实时浊度法进行最佳引物组的筛选 ．并 分析该方法 的特异性和灵敏度 。结果 HCoV—HKU1AL MP扩增方法针对其他病原微生物及人类基 因组无反应信号 。 该方法可以检测到 1拷贝／l的HCoV—HKU1质粒 。结论 HCoV—HKU1LAMP扩增方法特异性好、灵敏度高，在I临 床鉴别诊断和 口岸冠状病毒的检测中具有很好 的应用前景 。 关键词 ：环介导等温扩增 ；人冠状病毒 HKU1；检测 ；研究 中图分类号：R446．6 文献标识码 ：B Study ofloop-mediated isothermalamplification techniquefor detection ofHC0V—HKU1 LIU Sheng-ya，‘ZHU Yu--lan，HU Kong--xin，XIE Cong-xian，ZHEN Sheng-xi，XU Yuan ~Shenzhen InternationalTravelHeahhcareCenter，Shenzhen，Guangdong 518033，China Abstract：Objective ToestablisharapiddetectionmethodofhumancoronavirusHKU1(HCoV—HKU1)basedon loop-mediated isothermalamplification (LAMP)．Methods With theapplication ofAL MP，five setsofLAMP primerswere designed．The synhtesized HCoV-HKU1genewasused asa template，and hte optimalprimers were setby real-time turbidity mehtod．Specificity and sensitivity ofthe method wereassessed．Results Ohterpathogenic organismsand human genome in themehtodhavenotshown anyresponse signa1．In the experimentofsensitivity， HCoV-HKU1plasmid genehad a detection limitof 1copy／~lin each reaction．Conclusion Th is study indicates thatourLAMP method isarapid，sensitive，specificmethod to detectpahtogen ofHCoV-HKU1，and hasa good applicationprospectin clinical differential diagnosisandcoronavirusmonitoringofport． Key words：AL MP；HCoV—HKUl；Detection；Study 国境卫生检疫把守国门一线，防控疫病疫情，与 岁肺炎患者鼻咽抽吸物中发现了人冠状病毒HCov_ 人 民群众生命健康安全息息相关。改革开放 以来， HKU1(Humanc