靶向肿瘤血管的自杀基因联合放射治疗鼻咽癌裸鼠移植瘤的研究.pdf

⑧ 中山大学医学院硕士论文 中文摘要 杀基因系统(AdKDR—tk／GCV 值得探讨。 研究目的 毒胸苷激酶基因(herpessimplexvirus—thymidine 自杀基因系统(AdKDR—tk／GCV 联合气o NPC是否具有协同杀伤作用以及作用的大小，为NPC的临床治疗提供新思路和方 法。 材料和方法 1细胞培养 1．1细胞株人鼻咽癌CNE一2细胞株。 1．2实验材料RPMI1640培养基、超净工作台、78一l型电热恒温培养箱等。 1．3实验方法 将CNE 基培养，并于培养液中加入青霉素100 合配成消化液，制成每毫升含5×106个细胞悬液。 2重组腺病毒构建(由北京大学深圳医院李宝金博士构建) II 2．1实验材料pBluescript 及胚胎肾细胞系293细胞等。 2．2实验方法 细胞中包装、扩增。 II ⑩ 山大学医学院硕士论文 中文摘要 3裸鼠鼻咽癌移植瘤模型的建立 3．2实验材料lml医用注射器和裸鼠饲养房等。 3．3实验方法将含1×106个(0．2 m1)CNE一2细胞的悬液注射到裸鼠背侧右后 肢上部皮下后，于中山大学动物实验中心二级以上动物实验室饲养，并定期观察 记录移植瘤生长情况。 4动物分组和治疗 4．1实验材料重组腺病毒系统(AdKDR—tk GCV)、780C型”co机等。 4．2实验方法 4．2．1动物分组CNE 4．2．2治疗分别对I、III、Ⅳ组裸鼠瘤体内进行多点注射重组腺病毒液共 100 时，同时向I、III组小鼠腹腔注射GCV 后12小时以水合氯醛300mg／kg腹腔内注射，麻醉后施行“co Y射线局部外照 荆裸鼠移植瘤(1 外照射一次，共7次，外照射总剂量14Gy。 4．2．3动态观察记录裸鼠移植瘤生长大小治疗前l天及治疗开始后的第3天， 径，绘制瘤体生长曲线。 4．2．4处死裸鼠、剥离肿瘤并测量实体瘤质量治疗结束后第8天处死裸鼠，剥 离瘤块并称重，计算各组的肿瘤质量抑制率。 III ⑩ {l山大学医学院硕十论文 中文摘要 标本备用。 5常规病理学检查 箱、组织切片机等。 5．2实验方法采用切片、脱蜡、苏木素、伊红染色及脱水步骤。 6免疫组化染色 6．1实验材料 鼠抗人CD34单克隆抗体、BIOTINYLATED—GOAT 素一过氧化酶复合物、电子灭平、真空干燥箱、微量可调移液器、微波炉等。 6．2实验方法 及亲合素一过氧化酶复合物和复染苏木素步骤。 Weidner方法计数肿瘤微血管密度(Microvesseldensity，MVD)。 7 统计学方法实验结果采用采用SPSS11．0统计学软件，瘤体体积、质量 及}lVD值均以X±S表示，组问均数比较采用f检验进行分析。 结果 1 IIKDR-tk鉴定 pBluescript 测序结果与提供资料相符。 2重组腺病毒质粒pAdKDR—tk鉴定 一致。