荧光共振能量转移技术在SARS冠状病毒S蛋白介导的免疫损伤信号转导机制的研究中的应用.pdf

荧光，L振能量转移技术在SAPS冠状病毒S蛋白介导的免疫损伤信号转导机制研究中的应用 Kinase Jak蛋白酪氨酸激酶 JAK Janus MEM MinimumEssentialMedium MEM培养基 Ncc NormalizedCrossCorrelation 标准化互相关法 PAGE Polyacrylumidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳 PCR ChainReaction Polymerase 聚合酶链反应 ROI OfInterested Region 感兴趣区域 rpm RationPerMinute 每分钟转速 SARS severeacute respiratorysyndrome严重急性呼吸综合症 SBT SpectralBleed-Throughs光谱渗透 SDS sodium sulfonate 十二烷基磺酸钠 dodecyl S-Pr Protein 刺突蛋白 Spike 双讯 11。a?8du。8。and 119“81 A。‘17a‘10“of信号转导和转录激活因子 lranscrlptlon TAM Tamoxifen 三苯氧胺 TEMED 四甲基乙二胺 Tetramethylethylenediamine WesternBlot 蛋白质免疫印迹法 ■两 Wide—Field Microscope 宽场显微镜 low YFP Yel FluorescentProtein 黄色荧光蛋白 2 荧光共振能量转移技术在sAIls冠状病毒S蛋白介导的免疫损伤信号转导机制研究中的应用 荧光共振能量转移技术在SARS冠状病毒S蛋白介导的免疫 损伤信号转导机制研究中的应用 中文摘要 目的： 活细胞在刺激因子作用下细胞内蛋白质分子间的相互作用以及由此而产生 的信号转导是一个动态的过程，传统的免疫共沉淀等研究方法不可能进行可视性 的、实时动态观察，因而可能丢失某些重要信息。因此，发展与建立一种能够在 活细胞水平实时动态观察蛋白一蛋白之问相互作用的技术方法，对于研究生命过 程细胞重要的病理生理反应及依赖的信号转导机制具有重要的科学应用价值。荧 Resonance 光共振能量转移(FluorescenceEnergyTransfer，FRET)技术的优 势在于能够定位、实时动态检测活细胞内蛋白质间相互作用或蛋白质构像的变 化，已经在生命科学领域研究生物大分子相互作用过程中显示出了其极大的应用 拓展潜力。本课题通过建立以宽场荧光显微镜为基础的FRET测定技术平台，研究 Acute 严重急性呼吸综合症(SevereRespiratorySyndrome，SARS)冠状病毒刺 突蛋白(Spike，S)蛋白介导免疫损伤的可