致肾盂肾炎大肠杆菌132菌株消减文库的构建及筛选.pdfVIP

中文摘要 的完整ORF。 结果： 库。 ， 2．随机挑取其中的350个克隆，经PCR和斑点杂交筛选，挑选93个克隆测序， 个为与致病相关基因序列，8个为与代谢与物质转运相关基因序列，2个为 与外膜蛋白有关基因序列，3个为与调节相关基因序列，还有11个为未知功 能蛋白的基因和5个其它功能未分类的基因序列。另有19个UPECl32特异 性SSH片段与GenBank注册的非UPEC菌株相关序列显示高度的相似性， 其中13个与其他大肠杆菌tRNA或质粒序列相关，其他6个与沙门氏菌或志 贺氏菌等的序列相关．此外，有lO个SSH片段重复出现，6个片段为使用 K-12 均未发现与E．coli MGl655相关的序列，表明我们获得的UPECl32基 提交GenBank注册，注册号为EF488001． 的片段，进一步利用Proscan(Version1．7)软件分析，获得一个1311bp的可能 的ORF，暂命名为R049(1311bp)。 结论： 本研究已成功地构建了UPECl32菌株基因组DNA消减文库。并获取了 UPEC 132的特异性片段，为致肾盂肾炎大肠杆菌致病机理的深入研究奠定了良 好的基础。 Ⅱ 中文摘要 关键词： 致肾盂肾炎大肠杆菌； 抑制性消减杂交； 特异性SSH片段；斑点杂交； 基因组步移 Ill 英文摘要 Abstract Objective： Toconstruct and DNA of E．coli sa陀龃genomiclibraryuropathogenie132(UPEC subtractive thestrain 132)bysuppression hybridization(SSH)．Toidentify specific DNA fromDNA E．coli furthelto 132and obtain sequences libraryofuropathogenic the flameofnovdDNA openreading fragment． Methods： subtractive toconstructDNA of 1．Usingsuppression hybridization library E．coli132andthe DNAofUPECl32andMGl655were uropathogenic genome obtaincdastesteranddriver．Thentester DNAwas withdriver hybridized DNA twice andunderwentnestedPCRtwice．ThePCR was with product