外源激素控制奶牛和奶山羊超数卵泡同步发育及其卵母细胞发育潜能的研究.pdf

摘要 著性差异，但就囊胚发育率，屠窜场组的最低(p‘0．01)，FSHl2hr组次之(p ‘0．01)，其它三组之间的囊胚发育率差异不显著；当将这些囊胚移植同步发情 的受体牛后，来自屠宰场的囊胚无一着床(未见孕囊)，而在四组外源激素处理 隆胚胎实现全程发育至诞生克隆后代。 上述五个实验组的卵泡的生理生化特征分析表明：未经激素处理的对照组 中卵泡颗粒细胞中Bax以及卵泡液内IGFBP蛋白的过量表达使卵泡进入凋亡的中 后期，使屠宰场组卵母细胞发育能力不足，而FSHl2hr组卵泡仍处于活跃生长期， 故几乎未检测到Bax以及IGFBP蛋白的表达，但FSHrmRNA含量处于高水平，使屠 FSHl2hr组来源的卵母细胞的发育能力亦不足；当卵巢卵泡经历48hr(即 蛋白，卵泡液中呈现IGFBP，卵泡处于早期闭锁状态，由FSH依赖期转为LH依赖 期，表现为高水平转录LHrmRNA，致使卵母细胞的发育潜能增加，表现为核移 植囊胚发育率上升：添加和延长LH的处理时间可使卵胞质获得完全成熟，表现 为核移植后重构胚的着床率、着床后发育率以及出生率的提高。 为充分利用卵巢种质资源，本研究又以青春期之前的奶IlI羊为研究对象， 探索青春期之前家畜卵巢卵泡发育的特点以及其卵母细胞的发育能力。为此， 本研究比较了几种激素小同组合的处理方法(对照、FSH、E2一P4和E2一P4一FSH) 对出生39-60日龄(又称早青春期前)奶山羊卵巢的大小、卵泡数量及其大小 的影响；同时将出生39-120日龄奶山羊按不同年龄段分成三组，研究不同年龄 段经激素处理后对卵泡招募起始生长数量的影响：然后，比较了来自E2一P4一FSH 和FSH处理的早青春期前奶山羊卵巢中直径大于3mm卵泡的卵母细胞减数分裂 能力：最后，通过SCNT方法验证E2-P4-FSH处理的早青春期前奶山羊卵巢直径 大于3mm卵泡的卵母细胞的发育能力。 在四组激素处理的早青春期前奶lIJ羊中，E2-P4-FSH处理组产生了最大的卵 巢、最高的卵泡数量(直径大于3mm)。在不同年龄段的E2一P4一FSH处理组中， 39-60天组奶IIJ羊卵巢上直径大于3firel的卵泡数量显著高于6卜90天和91—120 天组的。卵母细胞减数分裂能力的分析结果表明，来自E2-P4-FSH处理组的卵 母细胞减数分裂能力显著高于FSH处理组的卵母细胞。与E2～P4一FSH处理后的 成年奶LJl羊卵母细胞相比，早青春期前奶IIJ羊卵母细胞发育能力较低：成熟后 22．1％，p 用于体细胞核移植后的囊胚发育率低于成年奶山羊(15．3％versus lI 摘要 0．01)Jo然而，早青春期前的奶f“羊经E2一P4一FSIJ处理后，每头羊卵巢上直径大 Versus28±5．0)，冈此，每 于3唧的卵泡数显著高于成年奶IlI羊(1084-10．3 头早青春期前奶IlJ羊产生的囊胚绝对数量显著高于成年奶山羊(7．1±2．7 versus4．2--+1．4)。 佳的促卵泡超数发育和卵母细胞获得发育潜能的不同外源激素组合处理组，此 组合处理的供体牛卵巢能获得具备完全发育潜能的卵母细胞；早青春期前奶L【j 羊经E2-P4-FSH亦能够为体细胞核移植研究提供相对多数量的具备一定发育能 力的成熟卵，对其进一步的深入研究有颦自幼龄动物获取大量具备完全发育能 力的卵母细胞。 关键词：奶牛，卵泡，卵，E2-P4-FSH-LH组合处理，青春期前奶山羊， 着床前发育，着床后发育 nI Abstract ABSTRACT in and ofovarestrictsthe of research Thelack applicationcloningtechni