人血管内皮生长因子受体-2基因（KDR）在链霉菌和大肠杆菌的克隆表达及其抑制剂筛选模型的构建的研究.pdf

中国协和医科大学博士论文 RT-PCRReverse oanscri面oapol”㈣∞ 逆转录聚合酶链式反应 RTK kimse Receptortyrosine 酪氨酸激酶受体 SDS-- SDS·-polyacrylamidegel SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 PAGE Electrophoresis SH Ser homologyregion Set同源区 S．1ividans lividans Streptomyces 变铅青链霉菌 SNP nucleotide Single polymo倘sm 单核苷酸多态性 TBS Tris-bufferedsaJine Tris缓冲盐溶液 TCA Tricholorese 三氯乙酸 TEMED 四甲基乙二胺 NN斟：N-tetramethylethylenediamine Thio Thiostrepton 硫链丝菌素 Tris Tfis(hydroxymethyl)aminomethane三(羟甲基)氨基甲烷 VEGF Vascular end001efialfactor growth 血管内皮生长因子 VEGFR-2 Vasculafendothefial factor growth 血管内皮生长因子受体．2 receptor-2 X-gal 5-溴--4--氯一3一吲哚·B-D 5-bromo-4-chloro-3-indolyl一}D- galactoside 一半乳糖苷 3 中国协和医科大学博士论文 摘 要 血管生成是毛细血管从已构建的毛细血管网中以出芽方式新生的过程，参与 许多病理和生理过程如伤口愈合、组织再生、子宫内膜周期性增生以及肿瘤的转 移和血管生成。尤其在实体瘤的恶性生长和转移中，肿瘤的血管生成起到重要的 作用。血管内皮生长因子(Vascularendothelial 皮细胞特异的有丝分裂原，直接参与了血管形成这个过程，促进内皮细胞分裂增 殖，促使新生血管形成，同时还可有效地提高血管的通透性。VEGF这一功能是 通过和其特异性受体结合来发挥作用的。VEGF受体家族主要包括三个成员： 分化反应中最为重要，是内皮细胞VEGF信号传导的主要执行者，VEGF与KDR 结合使受体二聚体化，迸一步激发KDR酪氨酸发生磷酸化，导致自身酶活性和 下游信号相关酶类的激活，从而调节血管内皮细胞相关反应。新生血管的形成对 恶性肿瘤的生长是必不可少的因素，因而以KDR为靶点进行药物设计和筛选可 成为抗肿瘤血管生成的重要方略。 个氨基酸。由胞外7个Ig样结构域，一个跨膜域和胞内域组成。胞外域由766个 氨基酸组成，第2．3 k样结构域是主要VEGF结合区。KDR胞内区有565个氨基 酸组成，可分为激酶功能区、68个氨基酸的酪氨酸激酶插入区和羧基末端。 本研究从人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中提取总RNA，以其为模板，通过 RT-PCR扩增获得编码KDR编码胞外区1-3Ig样结构域(KDR-ED)和胞内酪氨 酸激酶催化区域(KDR．cD)的基因片段。测序结果同已知KDR基