食管癌细胞中fascin基因转录调控机制初步的研究.pdf

5、以pBF．1435为模板进行嵌套缺失试验，获得系列缺失子，测序。将测序结 果正确的缺失子和对照质粒pGLB、内参照质粒pRLTK一同瞬时转染ECl09细胞， 培养48-J、时后裂解细胞进行双荧光素酶报告基因检测。 6、生物信息学预测转录起始位点上游387bp区段内存在哪些潜在的转录调控 元件。 box)缺失表达载体，测序。 8、以空载体pGLB为对照，将测序结果正确的重组质粒与内参照质粒pRL-TK 一同瞬时转染ECl09细胞，培养48小时后裂解细胞进行双荧光素酶报告基因检 测，结果分析。 结果和结论： 证明确为fascin基因，除四个碱基不同外，相似度达到99．9％。 四条片断，测序结果经NCBI／BLAST，证明扩增结果正确，与预期扩增长度吻 合。 3、成功构建萤火虫荧光素酶报告基因表达载体pBF．2900--436。 素酶表达活性，结果表B羽fascin基因在ECl09细胞中确有显著的启动子活性，且启 动子区至少位于转录起始位点上游436bp内。 5、通过嵌套缺失所得缺失子测序，表明成功获取系列缺失子质粒 pBF·1435-+82。 6、双荧光素酶报告基因检测系统检测系列缺失子在ECl09细胞中启动荧光素 酶表达活性，结果分析确定fascin基因核心启动子区位于转录起始位点上游316bp 到22bp的区段内。 5’侧翼．387区段内潜在 7、应用转录因子数据库软件AliBaba2．1分析预$Yfascin 的转录因子结合位点，总共发现56个转录因子，其中包含多个SPl结合位点，在靠 近TATA框处存在一段DNA序列，可同时结合CREB、C／EBP alpha、ATF、CRE- BPl、e-Jun等多个转录因子。 9、双荧光素酶报告基因检测系统分析系列元件缺失质粒在ECl09细胞中启动 Ⅱ 因转录调控过程中发挥了至关重要的作用，是食管癌细胞dPfascin基因调控转录表 blot、EMSA、RNAi等技 达的关键转录因子。尽管如此，还需要采用包括Western 术来最终证实Spl对fascin基因在食管癌细胞中表达的调控机制。 结论：综上所述，本研究初步鉴定了食管癌细胞系EClOgdPfascin基因的核心启动 子区，且在国际上首次证实结合位点：庄=fascin基因上游．74一．59bp的Spl元件是调控 该基因在ECl09细胞中转录表达的关键元件。这一发现有助于对食管癌侵袭转移 机制的了解，并为寻找针对食管癌的肿瘤靶向生物治疗方法奠定了基础。 关键词：fascin基因；食管癌细胞；核心启动子区；转录因子；双荧光素酶报告基 因检测 Ⅲ of Mechanism PrimaryStudyTranscriptionalRegulatory Carcinoma Genein Cells offascin Esophageal Guo Zhang-Yan Abstract：Cancerhasbecomeoneofthreekillerswhichthreatenhumanhealth． researcheshaddemonstratedtheone invasionandmetastasis Many that,on hand，tumor are forthe andthefailureof ontheother responsiblepoorprognosis