糖尿病大鼠门静脉胰岛细胞移植后CD62L、CD34表达的变化.pdfVIP

声 明 此论文的完成受益于国家自然基金课题《细胞黏附分子与胰岛细 胞移植的关系临床实验研究》，基金编 课题负责人：广州医学院第二附属医院器官移植中心潘光辉教 授。特此感谢！ 55 糖尿病大鼠门静脉胰岛细胞移植后 CD62L、CD34 表达的变化 研究生：蒋 鸿 涛 导 师：王 毅 教授 中文摘要 目的： 1、探讨STZ（链脲佐菌素）建立 1型糖尿病大鼠模型的最适合剂量。 2、探讨成年SD 大鼠胰岛细胞分离、纯化以及胰岛细胞质量的鉴定方法；胰 岛细胞门静脉移植前后外周血血糖、CD62L（LECAM-1，L-选择素）以及胰岛细 胞移植（PIT）后肝组织内CD62L、CD34 的表达变化，探讨PIT 后排斥反应发生 的可能机制，为临床应用胰岛细胞移植治疗糖尿病提供实验依据。 材料和方法： 1、建立糖尿病大鼠模型：将 120 只Wistar 大鼠随机分为五组，A 组： NS 组，NS 腹腔内注射；B 组：柠檬酸缓冲液组，柠檬酸缓冲液腹腔内注射；C 组： 链脲佐菌素（STZ）腹腔内注射（55mg/Kg）；D 组：STZ 腹腔内注射（65mg/Kg）； E 组：STZ 腹腔内注射（75mg/Kg）。观察注射后外周血血糖值、尿糖值、大鼠体 [1] 成模标准判断五组的成模率。 重、饮水量及一般情况的变化，根据刘学政等 2、①成年 SD 大鼠胰岛细胞分离、纯化和质量鉴定：经胆总管内逆行灌注 胶原酶 V 的方法消化胰腺组织，Ficoll400 非连续密度梯度离心纯化消化产物， 获得胰岛细胞后双硫腙（DTZ）染色、吖啶橙-碘丙啶（AO-PI） 双染色，结合 糖刺激胰岛素释放试验鉴定胰岛细胞的纯度、活率等。②门静脉胰岛细胞移植 （PIT）后CD62L、CD34 的表达变化：40 只Wistar 糖尿病大鼠随机分为四组， A 组：模型组，不做任何处理；B 组：手术组，门静脉移植达尔伯克(氏)必需基 本培养液（DMEM 液，0.8～1.0ml∕kg，含糖 5.6mmol/L），术前一天开始腹腔 注射 NS；C 组：生理盐水组，门静脉移植已分离纯化的胰岛细胞，术前一天开 3 始腹腔注射NS；D 组：免疫抑制剂组，术前 1 天开始腹腔注射CsA（３mg／kg/d） + MMF（20mg／kg/d）。其中C 组、D 组胰岛细胞移植物来自 SD 大鼠，提取两 只正常SD 大鼠胰岛细胞供给一只Wistar 大鼠糖尿病模型。以血糖仪检测外周血 血糖；单克隆抗体流式细胞仪技术检测外周血CD62L 的表达；免疫组织化学SP 法检测肝组织CD62L、CD34 的表达。 结果： 1、A 组、B 组成模率为0，C 组成模率为8.33％，D 组和E 组成模率为91.67%； 成模率比较：A 组与 B 组无显著差异（P0.05）, C 组与 D 组、E 组差异显著 （P0.01），D 组与E 组无显著差异（P0.05）；D 组和E 组大鼠注射 STZ 后血 糖值明显增高、体重增加明显减缓或不增加，一般情况较差，饮水量和大小便量 明显增加；A、B、C、D 四组成模后2 周内死亡率均为零，E 组大鼠死亡6 只， 达27.3％，且感染率高达50％。 2、①大鼠胰腺经消化、纯化后获得的胰岛细胞数为430-690 个胰岛/胰腺， 平均为520 士70 个胰岛/胰腺，存活率在90%以上，纯度为 85% 以上，胰岛素 释放试验显示大鼠胰岛细胞经高糖刺激后胰岛素分泌是低糖刺激分泌的 2.7 倍 （P0.05）。表明胰岛细胞功能良好。②模型组和手术组比较：外周血血糖值、 CD62L，肝组织内 CD62L，CD34 的表达未发现显著性差异（P0.05）；NS 组和免 疫抑制组比较：外周血血糖值、CD62L，肝组织内 CD62L、CD34 的表达有显著性