体内灌注诱导骨髓基质干细胞构建组织工程骨的实验的研究.pdf

摘要 显著地促进BMSC的增殖，并呈剂量依赖性。两种生长因子联合作用的效应高于 第8章：rhBMP．2及rhbFGF对山羊骨髓基质干细胞分化的效应 采用碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒及考马斯亮兰测定法检测单独及联合旋加 平以反映对细胞分化作用的影响，并进行统计学分析。结果：rhBMP．2能在较长 时间内明显促进细胞ALP活性及蛋白质含量，而rhbFGF则起到抑制作用，且均 呈剂量依赖性。rhBMP．2单独作用与两种生长因子联合作用的效应相近，均高于 均能够显著地促进山羊BMSC的分化效应。 第9章：增强型绿色荧光蛋白基因质粒转染骨髓基质干细胞 目的：探讨以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种 子细胞示踪剂的可行性。方法：选取12月龄中国青山羊2只作为BMSC供体。将 II酶切鉴定。脂 已转染pEGFP—N2的大肠杆菌109菌种，进行质粒提取并经Ava 质体(1ipofectamine 荧光的转染效率。以未标记的同期细胞作对照。结果：质粒经酶切后电泳，可 24h后绿色荧光表达率35％；经G418筛选，转染6个月后绿色荧光表达率75％， 同时对照组未观察到绿色荧光。结论：脂质体介导法转染的pEGFP—N2标记 BMSC，是一种理想的标记方法。 第10章：增强型绿色荧光蛋白基因质粒标记技术示踪组织工程化骨形成 目的：探讨以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种 子细胞示踪组织工程化骨形成的可行性。方法：将标记与未标记细胞经成骨诱 导分化后，检测碱性磷酸酶(ALP)活性和四环素钙结节染色，以未标记的同期细 胞作对照。将标记细胞接种于珊瑚支架，形成BMSC．珊瑚复合物，分别于体外培 IIl 摘要 养4d、7d、14d后进行电镜扫描观察。将体外培养7d的BMSC．珊瑚复合物移植于 裸鼠皮下，8周后取出，荧光显微镜下进行示踪观察，HE染色观察组织结构。以 未标记的BMSC．珊瑚复合物、单纯珊瑚作对照。结果：与对照组相比，标记细 胞碱性磷酸酶活性差异无统计学意义(P0．05)，均具有钙结节形成能力。标 记细胞与珊瑚材料贴附生长良好，并分泌胶原纤维及钙盐结晶样基质。组织学 示新生骨样组织围绕材料孔隙生成；新生组织细胞内有绿色荧光清晰表达，同 时对照组未观察到绿色荧光。结论：脂质体介导法转染的pEGFP—N2标记BMSC， 可用于裸鼠体内示踪，是一种理想的组织工程化骨组织的示踪方法。 第11章：山羊胫骨大节段骨缺损模型的制备 目的：为骨组织工程的研究提供理想的动物模型。方法：取9只青山羊随机分3 组，制备单侧胫骨25mm的骨膜与骨缺损，重建钢板内固定，术后放射学检查、 组织学方法评价骨缺损自行修复情况。结果：术后所有动物骨缺损处X线片Earle 评分均为0分，组织学显示无骨组织长人。结论：山羊胫骨适于制备骨缺损和重 建钢板内固定模型，其25mm大段骨缺损模型是研究组织工程骨较为理想的动物 模型。 第12章：近同构模型修复山羊胫骨大段骨缺损的初步研究 目的：探索骨组织工程近同构模型修复羊胫骨干骨缺损的可行性。方法：体外 扩增自体骨髓基质干细胞，与珊瑚支架材料复合，植入山羊胫骨缺损处，同时 通过便携式微量泵联合皮下植入式给药装置，建立近同构模型一可调控的体内 灌注诱导成骨微环境系统，定时注入DMEM培养液、细胞因子rhbFGF和 rhBMP．2。结果：术后8W观察结果：术后8W组织切片HE染色观察到近同构模 型组骨组织形成；对照组仅见纤维组织长入。x线观察，术后8W近同构模型组织 工程骨周围形成骨痂，并与胫骨缺损端融合；对照组术后8W时支架材料部分降 解、吸收。结论：近同构模型构建的组织工程化人工骨具有修复大动物(羊)负 重骨(胫骨)的节段性缺损的可行性。 关键词：骨髓基质干细胞；骨缺损：绿色荧光蛋白；近同构模型：组织工程； IV Abstract ABSTRACT Massivebonedefectresultedfrom andetcis