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nanegnun 纳克
唱∞ opticaldensity 光密度值
∞ diamine 邻苯二胺
ortho-phenylene
帆 ovalbumin 鸡卵清白蛋白
哪 saline
phosphate-buffered 磷酸盐缓冲液生理盐水
嗍 bufferedsalinewithTween 磷酸盐.吐温缓冲溶液
phosphate
l童 polyethyleneglycol 聚乙二醇
m ionconcentration 氢离子浓度
hydrogen
rotmionminute 转,分
per
舭‰ Ractopamine 莱克多巴胺
腭 microgram 微克
m micmliter 微升
|耋 barbitalbufferedsaline 巴比妥缓冲液
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莱克多巴胺单克隆抗体的研制
及其ELISA检测方法的建立
研究宅:阳露
导师:吴艳涛教授
刘秀梵教授
中文摘要
莱克多巴胺(Ractopamine,Rac)是一种B2.肾上腺素能兴奋剂,因具有营养
再分配、促进蛋白质合成,增加动物酮体瘦肉率,提高饲料转化率的作用,可能
被非法作为饲料添加剂用于畜产品的生产。但其残留对人类健康存在潜在的危害,
被禁止或限定在畜产品生产中使用。本研究旨在制各特异性针对莱克多巴胺的单
克隆抗体,并建屯竞争酶联免疫吸附法(cELISA)用于Rac的残留检测。
将阳离子化乍血清I,了蛋白(cBSA)和半抗原Rae进行偶联,经紫外光谱扫描
确定偶联成功,测定偶联物的蛋白浓度为O.70
mg/ml。以此偶联物Rac.cBSA作为
免疫原,与试剂盒自带佐剂乳化后免疫6周龄雌性BALB/e小鼠,每次免疫间隔2
周,待血清抗体效价明显升高后加强免疫,3天后取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞
有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命
效价分别为2x10’和l×105。该细胞株经体外培养、传代、冻存和复苏后抗体性质
稳定。特异性鉴定结果显示,单抗与Rac的类似物盐酸克伦特罗及两种偶联载体
均不发生交叉反应。采辟J
5D2的ICso为0.1ng/ml。说明单克隆抗体具有较好的亲和性。
将ELISA检测条件进行了优化,得到的最佳反应条件为:包被时间37℃作用
3h,封闭条件为37℃作用3h,封闭液选用1%明胶。用方阵滴定法确定最适包被
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