高效苏芸金芽孢杆菌遗传改良.pdf

南开大学博士研究生毕业(学位)论文 ＆9∥f 摘 要 高效基因组合的对鳞翅目棉铃虫、甜菜夜蛾等都有效的广谱工程菌。 种群的遗传多样性。多数不同H型和H亚型Bt标准株的全DNA指纹图具有菌株 特异性，能够彼此区分。血清型H1和H3a3b内不同实验室保藏的同源株指纹图 相同，为同一亚种；而H4a4b和H4a4c中不同特异株的指纹图则表现出差异性。 聚类分析进一步显示了Bt种群的遗传多样性，也证明蜡状芽孢杆菌并未形成独立 于苏芸金芽孢杆菌的聚群，从基因水平为这两个种在遗传上的同源性提供了新的 、 证据。L卫一弋… 利用特异引物PCR对本室分离的高效野生株Bt subsp．kenyae 过消除质粒处理获得丢失部分cry基因的无晶体株或变异株，为遗传改良提供受 体。 ·毒_—一 及消晶体株HD，1．Xcurl6(crylAc一，cry2+)、Bti4Q8、7404 进行接合转移，不同接合对的转移频率不同。得到一些特异接合子，但未得到含 pSBl402(cryl 能被3种供试目的质粒转化。而野生株Btit一1897及无晶体株Bti cur8 4Q8、HD。1一X 则成功地获得转化子。L舣， 为研究不同菌株凝集型和菌体表面S-layer的特性及其对遗传传递可能的影响。一每 供试的60株Bt和2株Bc分别与Bti 4Q2(Agr+)和Bti 4Q7(Agr一)混合培养观察凝集 南开大学博士研究生毕业(学位)论文 结构存在差异。结合他们在接合转移和电穿孔转化上存在的差异，说明菌株表面 结构和特性的不同是影响遗传物质传递的主要因素之一。少。。一一7 t．1897，筛 f利用电穿孔转化将外源质粒pSBl402(crylC)导入高效野生株Bti 获得转化子TTl3 t．1897基本一致。综合对几种试虫的毒力生物测定，工程菌T5对甜菜夜蛾和淡色 库蚊有高效，对棉铃虫无活性；工程菌TTl3对甜菜夜蛾和淡色库蚊有高效，对 棉铃虫有一定杀虫活性，且对棉铃虫的生长有明显抑制作用，是对多种鳞翅目和 双翅目害虫广谱有效并具有延缓抗性潜力的系列工程菌。、。“一 ／ ／ ≯ 关键词：苏芸金芽孢杆菌，杀虫晶体蛋白基因㈦蜘Ej由，接合转移，电穿孔转化， 遗传改良 南开大学博士研究生毕业(学位)论文 Abstract was Thiswork onthe ofseveral toxicwild focusinggenetic improvementhighly Bacillus transferand type conjugation—like thuringiensis(Bt)through the wastoconstructstrainswith a