透明质酸受体CD44和RHAMM在膀胱癌中表达特点.pdfVIP

前 言 在诸多影响癌浸润及转移的因素中，普遍存在于细胞外基质 (ECM)中的透明质酸(HA)与癌细胞表面/内部的相应受体的相 互作用，已引起广泛重视。CD44是较早发现的透明质酸(HA)受 体。该基因，特别是其拼接异构物(CD44v)能够促进多种人类癌 细胞的转移。然而，来自膀耽癌的多数研究结果显示，CD44的表 达随肿瘤的进展而呈进行性降低甚至消失。因此提示在膀耽癌中 可能存在不依赖于CD44的分子通路，为此本文检测了CD44尤其 是拼接异构物(CD44v)和另一透明质酸新受体，透明质酸介导的 细胞游走受体(RHAMM)在各类膀胧肿瘤中的表达情况，并做比 较性分析。 一良验材料 本组52例，膀耽肿瘤42例，包括24例膀耽表浅肿瘤(Ti，一 TI),18例膀耽浸润肿瘤(叭一戈)，正常(非癌)膀胧粘膜10例，取 自前列腺增生症病人。肿瘤标本在术后一小时内采集，液氮速冻， 一75℃储存。人膀耽癌细胞系Ej及BIU在含10%小牛血清的 RPMI一1640胎牛血清(Gibco,USA)中培养，50%CO,浓度，37`C 条件下孵育。 实 验 方 法 CD44和RHAMM的免疫组织化学染色 :CD44sly共识别单 克隆抗体Ab一2和抗CD44v6单克隆抗体VFF一18由德国遗传学 研究所HofmannM提供。抗人RHAMM抗体由英国皇家癌症研 究所VAssmann博士提供。首先用Ab一2抗CD44sly抗体筛选 ·1· CD44阳性病例，然后用抗CD44v6(VFF18)抗体检测v6的表达情 况。具体染色方法见以往文献报道。蛋白提取和Western印迹杂 交简要步骤，见文献。统计学分析利用X2检验，分析正常(非癌) 粘膜及膀脱癌组织间CD44,RHAMM表达率差异的显著性。 实 验 结 果 如图1B所示，正常(非癌)膀耽粘膜的CD44s/v的阳性率为 70.0%(7/10);膀胧表浅肿瘤的CD44s/v和v6阳性率均为45. 8%(11/24);在膀胧浸润肿瘤中，33.3%(5/18)有CD44s/v表达， 其中22.2%(4/18)呈v6阳性。CD44v6表达水平随着癌细胞的 侵袭而趋于减乃至消失。CD44EJ细胞系呈阴性，BIU呈弱阳性。 RHAMM免疫组化(图1C)显示:正常(非癌)膀胧组织RHAMM阳 性率为30.3%(3/10);膀胧表浅肿瘤和膀脱浸润肿瘤RHAMM阳 性率分别为75.0%(18/24)和72.2%(13/18);膀胧癌细胞系EJ 和BIU均有RHAMM的表达。光镜观察发现，RHAMM蛋白存在 于细胞表面和胞浆常以胞膜为主。Western印迹杂交显示(图 二):在正常(非癌)膀胧粘膜中无或仅有少量Mr93000一95000的 胞内型RHAMM表达;但在膀胧各类癌中，除Mr93000一9500()之 外，还可见较高水平的Mr72000和6400()的膜型RHAMM产生。 Xxz检验分析表明RHAMM基因表达与膀胧癌病理分期及浸润正 相关(P0.05);CD44的表达率在正常(非癌)粘膜和癌组织间有 显著差异(PO.05)。 讨 论 透明质酸受体CD44是一种跨膜糖蛋白，CD44基因位于人类 第11号染色体的短臂上，视其外显子的转录片段是否参与选择 ·2 · 性拼接分为正常型CD44(CD44s)和变异型CD44(CD44v)o CD44，尤其是CD44v，作为HA的主要受体参与多种癌症的侵袭和 转移。CD44v在结肠癌，乳腺癌及非何杰金氏淋瘤等肿瘤中的过 度表达常提示浸润性强，预后不良。包括v6在内的CD44v表达 常见于膀胧正常(非癌)粘膜和表浅乳头状癌，但随着癌细胞侵袭 深度的增加而下调甚至消失。本研究亦发现CD44v6在膀耽表浅 肿瘤的表达率为45.8%，而在深层浸润性肿瘤中仅为22.2%，表 达水平呈明显下降趋势，这说明与其它器官肿瘤的情况不同，提示 CD44表达与膀胧癌浸润呈负相关，因此在膀胧癌侵袭和转移机制 中