核因子κB在神经干细胞增殖过程中的调控作用.pdf

摘要 摘要 目的和意义： 脑缺血及脑损伤是严重威胁人类生命健康的多发病，其主要的病理损害是 神经元的损伤和缺失，导致神经功能缺损。直到上世纪90年代，神经再生与神 stem 经干细胞(neuralcells，NSCs)的发现为中枢神经系统损伤的修复带来了 希望。NSCs具有强大的增殖能力和多分化潜能，病理情况下，内、外源性的NSCs 能够增殖并向病灶区迁移，最终分化成各种类型的神经元和神经胶质细胞，以修 复损伤的神经系统。但研究发现内、外源性NSCs的存活、增殖能力有限，并且 易分化为胶质细胞；而微环境对NSCs的增殖、分化起着决定性作用。因而，如 何调控NSCs的增殖及分化方向，是应用NSCs治疗神经系统疾病之前急需解决 的问题。近年来研究发现，核因子一KB(nuclearfactor-kappaB，NF-KB)信号 系统与中枢神经系统疾病发生发展密切相关，并且可能参与了NSCs增殖分化的 调控，但其确切机制尚不清楚。 本实验通过观察NF—KB信号通路激活剂(肿瘤坏死因子Q，tumornecrosis B信号通路抑制剂(四氢化吡咯二硫代氨基甲酸盐， factor—alpha，TNF—Q)、NF—K pyrrollidine NF—K B在NSCs增殖过程中的调控作用；同时初步探讨稀土化合物氯化镧 (Lanthanum 步了解NSCs增殖分化的调控机制，为更好地利用NSCs治疗神经系统疾病提供 理论依据。 方法： neuralstemcel 1、小鼠神经干细胞(mouse ls，mNSCs)的分离培养及鉴定： 采用成球悬浮法分离培养mNSCs，至第三代后，行细胞冰冻切片，免疫组化 方法鉴定NSCs标志蛋白nestin。 TNF—a的NSCs培养液、含 组，分别采用常规NSCs培养液、含lOng／mk 0．1mmol／1 1~3天。 氯化镧组，以含氯化镧2．5／比mol／L的NSCs培养液培养NSCs II 摘要 3、观察指标及方法：采用免疫荧光细胞化学方法及WesternBlotting方法检 NF-K 测NSCs B活化状况(即P65在细胞中的分布变化)；采用免疫荧光细 计数、神经球体积测量方法观察NSCs的增殖状况。 结果： ． 1、mNSCs的生长状况及鉴定结果：mNSCs原代培养时，镜下见培养2天后细胞 分裂增殖逐渐形成呈悬浮生长的形态规则的神经球，球周边不断有分裂增殖 的细胞凸出。5、7天后球体积不断增大，球中央的细胞因营养缺乏而逐渐变 黑，予以传代。免疫细胞荧光法鉴定神经球中大部分为Nestin表达阳性细 胞。 2、NSCs的NF-K B活化状况：细胞免疫荧光染色结果显示，TNF-Q组可见明显 的p65活化由胞浆转位至胞核；而PDTC组P65仍表达在胞浆，未见核转位。 Western Blotting结果显示，TNF—c【组胞核NF—KB／p65蛋白含量显著高于 NF— 对照组，而PDTC组胞核p65蛋白含量极少。结果表明，TNF—Q能使mNSCs KB活化。 3、NSCs的增殖状况：神经球计数和神经球体积测量结果显示，TNF-Q组和氯化 106(∥m3)]， 的(18．7±1．8)％，pO．01。 以上研究结果表明，TNF—