鸡SIgA检测方法建立及其禽流感新城疫重组二联活疫苗诱导局部黏膜免疫研究.pdfVIP

摘要 禽类黏膜免疫作为机体抵御病原体感染的第一道免疫屏障具有重要意义。黏膜免疫的主要效 应因子为slgA，在黏膜表面阻止病原菌的秸附、增殖，启动免疫学生物活性，清除病原，保护 机体抗感染等方面发挥重要作用。 本研究重组表达了鸡SlgA重链片段蛋白，分离纯化后免疫BALB／c小鼠，并以鸡胆汁中分 离纯化的sIgA作为检测抗原，筛选出l株能够稳定分泌抗鸡SXgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株 的1株单克隆抗体具有SJgA的高度亲和力和特异性，为开展家禽黏膜免疫机制的研究提供了重 要技术手段。 在此基础上，用生物素标记纯化cl单抗腹水IgG，建立了新城疫病毒(NDV)及H5弧型 禽流感病毒(H5 原重组NDV活疫苗(rL-H5)免疫SPF鸡局部黏膜特异性SlgA免疫反应进行了研究。 结果，SPF雏鸡采用rL-H5经滴鼻点眼途径一次免疫，口腔．上呼吸道分泌液于免疫后2周， 可检测到NDV特异slgA免疫反应：免疫后3周能检测到低水平的H5AIV特异SlgA免瘦反应， 降至接近免疫前背景水平；小肠分泌液分别于免疫后4周检测到明显的NDV及H5AIV特异SIgA 免疫反应，明显滞后于口腔一上呼吸道反应，但两种SlgA抗体水平均显著高于口腔．上呼吸道分 泌液。 SPF育成鸡采用rL-H5经滴鼻点眼途径间隔16周二次加强免疫，口腔一上呼吸道分泌液NDV 及H5 AIV特异SlgA水平较一次免疫雏鸡反应明显提高。分别于免疫后一周即可检测到NDV及 H5A1V特异SlgA的显著增强免疫反应，2周后达到高峰，3周后迅速降至接近加强免疫前背景 水平；小肠黏膜分泌液中NDV及H5 A|V特异S]gk反应时相与口腔一上呼吸道相似，抗体高峰 出现不再表现滞后，但两种SlgA抗体水平同样显著高y-口腔．上呼吸道分泌液。 结果表明，重组NDV活载体疫苗rL—H5免疫后，可有效诱导上呼吸道及消化道黏膜NDV 及重组表达H5 AIV抗原特异性sIgA免疫反应；同呼吸道相比，消化道具备更为强大的黏膜sIgA 特异性免疫反应能力；初次免疫鸡呼吸道黏膜再次接触剑感染性NDV或H5AIV病毒抗原，可 形成显著的特异性SIgA增强免疫反应：重组活载体疫苗诱导NDV及H5AIV特异黏膜sIgA反 应具有启动快速、持续时间短暂的特点。上述结果部分阐明重组新城疫活载体疫苗rL—H5的免疫 保护机制，并对应用免疫程序的合理制定具有重要指导意义。 关键词。SJgA，ELISA，新城疫病毒，H5亚型禽流感，重组新城彳殳活载体疫苗 Abstract Mucosal of is asthefirst barrier poultry defense infectious immunity veryimportant against effectivefactorofmucosal in is pathogens．The immunitypoultrySecretorylmmunoglubulinA(SlgA)． has which functional to and of many attributes,servingpreventadheringmultiplicationpathogens． in infective toclean and from pdmingbiologicalactivityimmunology agentSpreventingpoultry irifection． Inthis recombinantchicken chain was and study,the