荧光素衍生物的合成及其表征.pdf

摘要 1871年Bayer首次合成出荧光素，由于其具有高的消光系数，在水中具有 较高的荧光量子产率，激发和发射波长都在可见光区，无毒的优点，一直被广泛 应用于生物分析领域。但是荧光素的自身特点也限制了它在许多研究领域中的进 一步应用。为了改善荧光素的性能，通过对其结构进行修饰，开发研制出许多的 荧光素衍生物，这些衍生物作为荧光试剂，更有利于对生物体进行检测。 本论文以荧光素为母体，从改善其亲脂性、特异选择性、荧光强度对pH值 的敏感范围、长波长、大斯托克斯位移五方面对其结构进行修饰，设计合成出一 系列酯化荧光素衍生物、活性基荧光素衍生物、氯代荧光素衍生物、二萘酚类荧 光素衍生物和不对称荧光素衍生物。并且，通过紫外一可见光谱和荧光光谱对这 些衍生物进行荧光性能检测，总结出其结构特点与其光学性能之间的关系。 首先，合成碳原子数为2-18的～系列羧酸荧光素酯，建立了长碳链羧酸荧 光素酯的合成路线。研究了羧酸荧光素酯的水解性能，包括自然水解及脂酶催化 水解规律。发现羧酸荧光素酯中的碳链长度与其水解性能之间的复杂关系，并且 筛选出优良的检测脂酶的荧光探针。 其次，研究改进了含活性基荧光素衍生物的合成方法，成功地采用柱色谱， 以氨水与醇作为洗脱液分离5位和6位的活性基荧光素异构体。并且通过比较， 对其光谱性能进行研究。 而后，按照荧光素的传统合成方法设计合成了五种氯代荧光素衍生物。分别 对它们的荧光性能进行了检测分析，发现其最大吸收波长和最大发射波长都向长 波方向偏移，而且荧光量子产率较高。研究了氯代荧光素衍生物的荧光性能与 pH值之间的关系。结果表明，氯代荧光素衍生物的荧光强度依赖于环境pH值 的变化，并且对pH值的敏感范围随氯原子取代个数不同向酸性环境偏移。因此， 这些氯代荧光素衍生物可以作为pH值荧光探针检测细胞内部的pH值，而且可 以在生理环境下以最大荧光强度进行检测。 然后，设计合成了具有大共轭体系的二萘酚类荧光素衍生物并通过紫外一可 见光谱和荧光光谱进行检测分析。发现这类衍生物的激发和发射波长明显向长波 偏移，由于它们的发射波长都大于600纳米，成为了近红外荧光标记试剂。 最后，通过两步法合成一系列不对称结构的荧光素衍生物7．1～7．9，对其光 学性能进行了检测分析，发现不对称的荧光素衍生物具有较大的斯托克斯位移、 双吸收和双发射波长，荧光强度对环境的pH敏感的优点。基于以上性能，不对 称结构的荧光素衍生物可以定量检测pH值并能用于其他生物分析领域。 通过以上合成和检测，筛选出性能优良的荧光探针，如检测脂酶的荧光探针 一荧光素十二酸酯，高荧光量子产率的pH值荧光探针—4(7)一氯荧光素，检测酸 67一四氯荧光素，近红外荧光探针一二 性介质的pH值荧光探针—2’，7’一二氯～4…5 萘酚荧光素及近红外活性基荧光探针一5(6)．羧基-二萘酚荧光素，双发射pH探针 一不对称荧光素7．1，7．4，7．6等。 关键词：荧光探针，荧光素衍生物，荧光素酯，活性基荧光素衍生物，氯代荧光 素衍生物，二萘酚荧光素衍生物，不对称荧光素衍生物 Abstract The offluoresceinwasfirst in1871．Fluoresceinwas byBayer synthesis reported usedinthe t0 extinction widely biologicalanalysis，duei乜11igh coefficient，high fluorescence in excitation and quantumyieldaqueoussolution,itswavelength emission inthevisible and Ssome wavelength range innoxiousness．However,it in