过氧化氢酶固体脂质纳米粒的制备及其稳定性的研究.pdf

摘 要 摘 要 过氧化氢酶能够以过氧化氢为底物，通过催化一对电子的转移而最终将其分解为水 和氧气，从而能起到清除自由基的作用，在医药业上具有良好的应用前景。过氧化氢酶 作为一种蛋白类药物，自身存在诸多的缺陷：稳定性差，在酸、碱或酶的作用下易失活； 分子量大，常以多聚体形式存在，难以通过胃肠道豁膜细胞，导致吸收屏障的产生；使 用不便，一般只能注射给药；体内半衰期短，消除快，无法充分发挥其疗效；在体内只 与特定的受体结合而起作用，受体在组织的分布特性会显著影响药效。为了克服其上述 缺点，本课题采用固体脂质纳米粒作为载体对过氧化氢酶进行包载，对其工艺进行优化， 制备出包封率高、粒子稳定的脂质体，并对过氧化氢纳米脂质体的释放性能以及释放出 的过氧化氢酶与原样过氧化氢酶的结构进行了比较。 采用多重乳状液（W/O/W ）法进行制备。通过单因素试验和响应面试验，对其制备 工艺进行了优化。首先，以酶活为评价指标综合考虑乳化效果，考察有机溶剂和乳化方 式的影响，结果表明以二氯甲烷/丙酮（1/1）作为有机溶剂，超声两步乳化时间分别20s 和 30s，效果最好。其次，以包封率为指标，在单因素实验基础上通过响应面设计考察 了内相乳化剂浓度、外相乳化剂浓度和第二相体积比的影响，得到最佳工艺参数：内相 乳化剂浓度 15.24%，外相乳化剂浓度 1%，第二相体积比 1:4。在上述最佳条件下，以 三棕榈酸甘三酯为固脂基质，所得样品包封率达到 74.51%，载药量为 3.58% 。三个因素 对包封率的影响：外相乳化剂浓度＞第二相体积比＞内相乳化剂浓度，且第二相体积比 与外相乳化剂浓度具有显著的交互作用。 在最佳工艺条件下，对三棕榈酸甘油酯及单硬脂酸甘油酯作为基质对包封率及粒子 形态的影响进行了分析，结果表明以三棕榈酸甘三酯得到的产品粒子形貌为球型、形态 较为均一、粒子稳定，但以单硬脂酸甘油酯制备得到的产品包封率和载药量较高。 在最佳工艺条件下，对三棕榈酸甘油酯及混合脂质（三棕榈酸甘油酯/MCT ）对包 封率、粒子分布及释放稳定性的影响进行了比较分析，结果表明加入少量 MCT （5% ） 有利于提高包封率（81.40% ）和载酶量（3.89% ），并对粒径、电位分布无太大影响。 体外释放研究表明 1.5%的甘氨酸能作为稳定剂，MCT 的加入能加快初期释放速率， 为体内迅速起效并维持较长平稳的血药浓度的治疗目标，开辟了一种制剂学的新手段。 将其释放曲线进行模型拟合，均符合 Higuchi 方程，表明体外释药性能符合长效制剂特 征。 对释放出的过氧化氢酶与原样过氧化氢酶进行酶活测定、远紫外- 圆二色光谱分析 和 SDS电泳，结果表明酶活力没有大的改变；其二级结构α-螺旋的含量基本不 变，而β-折叠和β-转角的含量有所差别，存在着β-折叠向β-转角转变的过程，故整 个过程酶的二级结构并未遭到破坏；电泳结果表明酶的亚基结构没有变化。 关键词：过氧化氢酶；固体脂质纳米粒；多重乳状液；包封率；粒子形态；粒子分 布；释放性能；二级结构 I Abstract Abstract Catalase has a good prospect in the pharmaceutical industry, because it could eliminate free radicals in vivo through transfer hydrogen peroxide into water. However, as a therapeutic protein, its poor stability and easily inactive in acid, alkali and enzyme conditions, the half-life in vivo is short, and it does not possess the required physicochemical properties to be absorbed at their t