免疫介导豚鼠脊髓运动神经元损伤的超微结构及钙稳衡改变.pdfVIP

维普资讯 第 26卷 第2期 电 子 显 微 学 报 Vol一26．No．2 2OO7年 4月 JournalofChineseElectronMicroscopySociety 2007—04 文章编号 ：1000．6281(2007)02-0153—05 免疫介导豚鼠脊髓运动神经元损伤的超微结构 及钙稳衡改变 李春岩 ，郭艳苏，田新英 ，刘亚玲 ，许 蕾，杨 程 ，吴东霞，吴淑玉 (河北医科大学第二医院神经内科 ，河北 石家庄 050O0O) 摘 要 ：应用常规透射 电镜及草酸盐一焦亚锑酸盐技术原位 固定细胞 内钙 ，对豚 鼠脊髓前角细胞 内的钙分布进行 超微定位 ，探讨钙稳衡改变在免疫介导运动神经元损伤 中的作用。结果发现模型组豚 鼠脊髓前角运动神经元可见 粗面内质 网扩张、线粒体肿胀、嵴排列紊乱等 。神经元周 围胶质细胞增生。在运动神经元扩张的粗面 内质 网池和 线粒体 内室可见数量不等颗粒状 电子致密的钙沉积物。线粒体 内室 内钙沉积颗粒与线粒体肿胀 的程度相关。星 彤胶质细胞 内肿胀的线粒体 内室及扩张的粗面 内质网池 内也可见电子致密钙沉积颗粒。因此认为，钙稳衡失调参 与 了免疫介导的运动神经元损伤过程。 关键词 ：钙 ；超微结构 ；运动神经元损伤 ；豚 鼠 中图分类号 ：R744．8；R361 ．3；Q336 文献标识码 ：A 肌萎缩侧索硬化 (amyotrophiclateralsclerosis， 900g)(北京维通利华实验动物技术有限公司)，以 AtS)是一种致死性神经系统变性疾病 ，以选择性 新鲜牛脊髓前角匀浆 0．18g～0．24g(湿重)与 0．5 上、下运动神经元变性、丢失为特征。．目前缺乏有效 rnl磷酸盐缓冲液、0．5Illl弗 氏佐剂制成油包水乳 的治疗方法。ALS发病机制研究主要集 中在 以下几 剂 ，于豚 鼠背部皮下，皮内分5个 ～6个点进行接种。 个方面n ：(1)Cu／ZnSOD1基因突变 ；(2)自身免疫 每隔4周免疫一次 ，共免疫 4次。除第一次免疫用 机制 ；(3)谷氨酸的兴奋毒作用 ；(4)钙超载 ；(5)氧化 完全弗氏佐剂外，以后3次均为不完全弗氏佐剂。10 应激；(6)细胞骨架异常等 。各个病因假说间并非独 只对照组豚鼠去除免疫原单纯 以佐剂和磷酸盐缓冲 立 ，也并不相互排斥 ，一个因素的异常可导致另一因 液制成油包水乳剂以同样方法接种。模型组于出现 素的改变 ，最终加重和促进损伤 的进一步发展。无 症状晚期 (不能 自行翻身)取材 ，对照组同时取材。 论哪个因素启动了运动神经元损伤过程 ，钙稳衡异 1．3 常规透射 电镜标本制作 常可能是导致细胞损伤的最终共 同通路。 速眠新注射液 (0．2ml／kg)麻醉动物后 ，经左心 本文 旨在建立免疫介导的运动神经元损伤模型 室至主动脉插管快速灌注磷酸缓冲液 100Illl；4％多 基础上 ，利用草酸盐 一焦亚锑酸盐技术原位固定细 聚甲醛．0．05％戊二醛混合液 300ml～500ml先快后 胞内钙，对脊髓前角细胞内的钙分布进行超微定位， 慢灌流固定 ；准确切取脊髓颈、腰膨大前角 4％戊二 并研究其与形态学变化之 间的关系，探讨钙稳衡改 醛浸泡固定 24h；1％四氧化锇酸 (OsO)后 固定 1h； 变在免疫介导的运动神经元损伤中的作用。 系列丙酮脱水、环氧树脂浸透、包埋 ，行 1m半薄切 片定位脊髓前角后 ，LeicaUCT超薄切片 70nm，醋酸 1 材料与方法 铀 一枸橼酸铅电子染色，JEM．1230型透射电镜观察。 1．1 动物 1．4