我国三个地方鸡品种体外培养细胞主要遗传学特性的研究.pdfVIP

摘 要 1．采用组织块贴壁培养法，对白耳鸡、文昌鸡和中国斗鸡8日龄胚胎进行初代和 传代培养，成功建立了三个鸡品种成纤维细胞系。冻存样本含量分别达57、53及43 细舢。 2．通过传代培养细胞染色体显示法，制备了染色体中期分裂相标本。分析结果 表明：2n染色体数目在白耳鸡、文昌鸡及中国斗鸡中分别占86％、92％及89％，所建 立的细胞系为稳定二倍体细胞系。染色体数目均为2n=78，包括lO对大型染色体和 29对微小染色体，染色体没有发现异常现象。性染色体雄性为同配ZZ型，雌性为异 配ZW型。 3．采用低离子强度聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析了LDH、MDH同工酶酶谱。结果表 明：三种鸡细胞LDH同工酶均出现清晰的4条酶谱，从负极到正极依次为LDH。、LDH2、 LDH3及LD}k。文昌鸡和中国斗鸡中出现LD地，着色不明显。五条酶带之间的距离基 本相似。呈对称性分布。MDH同工酶在三种鸡细胞中均呈现2条区带，靠近阳极且 泳动速度较快的是s-MDH，靠近阴极的是m-blDH。试验结果符合家鸡同工酶酶谱规律， 建立的细胞系间无交叉污染。 4．本试验将6ul脂质体介导2lag重组质粒pEGFP弋l转染文昌鸡细胞4811可获 得较满意的转染效率，为最佳优化组合。瞬时转染结果表明，转染48h，pEYFP-N1 质粒转染效率最高，在三种细胞中分别达50．41％、61．62％及49．65％。其次为 中仍有55．63％的效率。形态观察显示，绿色荧光均匀地充满细胞质和细胞核，只有 囊状小泡没有标记荧光。红色及青色荧光蛋白则主要分布于细胞核膜周围由诸多颗 粒状表达产物组成呈现环状轮廓。转染细胞具有正常的生长增值能力，形态为典型 成纤维细胞形态，生长中的细胞呈放射状。 关键词：家禽遗传资源；细胞系；染色体核型；同工酶：荧光蛋白；转染 Oil CharacteristicsinVitroCultured Researchthe Genetic of Major FibroblastThreeLocalChinese Cellsof Chickens Abstract and 1．Fibroblastcelllinesof、)lmiteearlobes chickenChinese chicken,Wenchang chickenwere established cultureandserial gamecock successfully byprimary subcultivationThe contentwas57．53and43 Thenumberoffrozen sample respectively tubewas and258 cellnumberfrozentubewas 322，237 respectively．Theper 1．52x10’．2．67x107and341×107cell／m1． respectively 2．The celIinWhiteearlobes chickenandChinese diploid chicken．Wenchang chickenis thechromosomal gamecock 86％，92％，and89％respectivelybyanalyzing metakinesis．Thechromosomalnumberofthreechickensis2n=78．consistOf10