PRRS、PCVD and CSF病毒多重PCR方法的建立及应用的研究.pdf

摘要 危害养猪业发展的一类重要的传染病，这三种疾病每年均给养猪业造成巨大的经 济损失。这三种病均能引起猪繁殖障碍和呼吸系统疾病，由于这三种疾病的临床 表现非常相似，临床诊断容易引起混淆，因此早期的鉴别诊断对控制这三种疾病 的流行显得尤其重要。目前针对这三种病的病原体的常规诊断方法有病原分离鉴 定和血清学等方法。病原分离鉴定繁琐、耗时、检出率低；血清学方法虽然简便 快速，但存在非特异性反应，并且不能完全区别免疫接种与自然感染阳性等缺点。 多重PCR方法还未见报道。本试验建立了一种快速、敏感、特异的检测PImSv、 PCV2和CSFV多重PCR方法，并使用该方法对临床病料进行了检测。 1检测PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR的建立 参照GeneBank收录的猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型标准株 (ATCCVR-2332)的ORF7保守序列、猪圆环病毒2型(AF38l175)的ORF2基因保 守序列和猪瘟病毒的E2基因保守序列，设计合成了三对特异性引物。通过优化 镁离子浓度、引物浓度和退火温度等条件，建立了检测PI浓SV、PCV2和CSFV 的多重PCR方法。该方法特异性强，灵敏度高，能检出三种病毒的最低含量分别 为4．8Pg、5．0 Pg和14．5pg。 2PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR方法的临床应用 六安、蚌埠、滁州、巢湖、淮北、宿州、阜阳和池州10个地区的120份临床疑 PI墩SV和PCV2的感染在安徽省猪群中最为严重，且有上升的趋势。此外， PRRSV的感染还存在明显的地区差异，其中安庆、六安和滁州地区感染严重。 ． PRRSV与PCV2的混合感染率最高。 3高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Nsp2 PRRSV美洲型标准株(ATCCVR．2332)PCR方法的比较 应用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(fNsp2 徽省合肥、安庆、六安、滁州、巢湖、淮北、宿州和池州8个地区的65份病料进 行同步检测，方法l对病料的阳性检出率为73．84％，方法2对病料的阳性检出率为 75．38％，两种检测方法的符合率达86．15％。生物统计结果表明，当前安徽省猪 群中PRRSV的感染以变异株为主。 以上研究表明，本试验建立的这种快速、敏感、特异的检测PRRSV、PCV2 和CSFV多重PCR方法具有重要的临床意义。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒，猪圆环病毒2型，猪瘟病毒，多重PCR，检 测 II Abstract caused and 刀jeinfectiousdiseases porcine respiratorysyndrome by reproductive circovirus2 classicalswinefever virus(PRRSV)，porcinetype(PCV2)and themainthreattothe of becoming virus(CSFV)are development totremendouseconomiclosses threeinfectious industry,andleading annually．The barrierand to and硒e diseasesinduce diseaseof reproduction respiratorysystempigs extremesimilaritiesofthethreeinfectiousdiseasesintheirclinicalmanifestations difficult