《MiR-122在AldoA介导的ob／ob小鼠肝脏代谢中的作用研究.》.pdf

PIItI! 脚 Ⅵ nv．pibb．ac．cn MiR．122在AldoA介导的ob／ob小鼠 肝脏代谢中的作用研究术 方志娟 ” 李 鹏 ” 刁文丽 蒋 埏 张辰宇 项 阳 佰i京大学生命科学学院，医药生物技术国家重点实验室，南京210093) 摘要 本实验室前期研究发现，2型糖尿病动物模型obo／b小鼠血清中miR．122的含量较正常C57BL／6小鼠显著升高．本文 进一步研究肝脏特异性miR-122及其靶蛋 白AldoA(果糖 1，6．二磷酸醛缩酶A)在obo／b小鼠肝脏代谢中的作用．首先，经 qRT．PCR技术检测发现 ob／ob小鼠肝脏miR．122水平较C57BL／6小鼠显著下降，而Westernblotting分析发现obo／b小鼠肝脏 其靶蛋白AldoA的表达水平显著上升．进一步以miR一122分子转染293T细胞后收集其分泌的微囊泡(microvesicles，Mrs)， 经qRT．PCR检测确认后采用特异性荧光染料DiI—C18标记MVs，以不同剂量尾静脉注射BALB／c小鼠体内，不同时间点取 肝组织做冰冻切片．在荧光显微镜下观察证实，包裹有miR．122的M~Ws通过循环系统进入肝脏，同时qRT．PCR定量分析发 现肝组织中miR．122含量显著升高，而蛋白质印迹检测发现其靶蛋白AldoA在肝脏 中表达显著下降．AldoA主要催化糖酵 解途径中果糖 1，6．二磷酸和磷酸二羟丙酮及甘油醛一3．磷酸之间的转变，miR．122靶向作用AldoA可能在2型糖尿病的发生 发展中发挥重要作用． 关键词 MiR一122，ob／ob小鼠，AldoA，2型糖尿病 学科分类号 Q74，Q291，R34 DOI：10．3724／SP．J．1206．2013．00097 2型糖尿病是 21世纪一种严重的慢性疾病， miR一122能够调节体内脂肪代谢，抑制正常小鼠肝 其死亡率约 占全球第五位川．胰岛素抵抗(Ⅱ是 2 脏中miR．122的表达能够导致肝脏脂肪酸氧化增强 型糖尿病的一个重要特征，主要发生在肝脏、骨骼 和肝脏脂肪合成的速率下降．本实验室前期研究结 肌和脂肪组织中．MicroRNA(miRNA)是一类 内源 果 显示 ，miR-122的表 达 水平 在 链尿 霉 素 性的长约 19～23个核苷酸的小分子单链非编码 (streptozotocin，STZ1诱导的糖尿病小鼠和ob／ob肥 RNA，由DNA转录产生，通常在转录后水平和翻 胖小鼠的血清中显著升 ，提示miR．122在肝脏 译水平参与调控基因表达 ．MiRNA作为一种强有 能量代谢中发挥着重要作用． 力的调控因子，调节约 60％的蛋 白质表达2[1．它参 果糖 1，6一二磷酸醛缩酶A(AldoA)是miR．122 与多种生物过程，包括生物个体发育、组织分化、 一 个 已报 道 的靶 基 因[13-141．它 编码 的蛋 白是 细胞的增殖和凋亡、病毒感染、能量代谢、癌症的 AldolaseA，即果糖 1，6．二磷酸醛缩酶A，主要催 发生发展等[3-41．本实验室前期研究发现，miRNA 化糖酵解途径中果糖 1，6．二磷酸和磷酸二羟丙酮 在血清中能够稳定存在[51，并且可以作为癌症和其 及甘油醛 ．3．磷酸之间的转变． 他疾病的一种新型生物标志物[6-8]． MiR一122是一种肝脏特异性的miRNA，在成 国家 自然科 学基金 资助项 目81270907 熟个体肝脏中高水平表达，占肝脏全部miRNA含 J1103512)． 共同第一作者． 量的70％左右[91．已有报道表明，miR．122参与了 + 通讯联系人． 细胞应激反应、肝癌形成以及丙型肝炎病毒(HCV)