《Nucleostemin siRNA对肝癌细胞HepG2增殖的影响.》.pdf

ISSN 1007．7626 中国生物化学与分子生物学报 http：／／cjbmb．bjmu．edu．an 2013年 11月 CN 11-3870／Q ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology 29(11)：1041～1047 NucleosteminsiRNA对肝癌细胞 HepG2增殖的影响 袁富文，程 倩，童坦君 (北京大学医学部生物化学与分子生物学系，北京大学衰老研究中心，北京 100191) 摘要 Nucleostemin(NS)作为核仁蛋 白，在神经干细胞、胚胎干细胞 以及某些肿瘤细胞 中均高表 达 ，在多种肿瘤细胞增殖和凋亡调控 中具有重要作用．本文通过瞬时转染NSsiRNA降低 NS的表 达 ，以探究NS对 HepG2细胞增殖和凋亡的影响．结果显示 ，下调 NS表达使 HepG2细胞增殖加快 。 G 期细胞减少，S期及 G ／M期细胞增加 ，凋亡减少．激光共聚焦实验表 明，NS与s期激酶相关蛋 白2(S-phasekinase—associatedprotein2，Skp2)在 HepG2细胞 中存在共定位现象；Co—IP实验证 明， NS与 Skp2能相互作用；Ns下调后 ，Skp2出核仁的数量增加 ，p27和 p53表达降低．总之 ，下调 NS 可促进 HepG2细胞 中Skp2从核仁逸 出，p27降解增强，同时p53表达下降，或 由此促进 HepG2细 胞增殖，抑制其凋亡． 关键词 HepG2；细胞增殖 ；nucleostemin(NS)；S期激酶相关蛋 白2 中图分类号 Q7；Q8 TheImpactofNucleostem in siRNA on theProliferationofHepG2 Cells YUANFu-Wen，CHENGQian，TONGTan—Jun (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，PekingUniversityHealthScienceCenter， PekingUniversityResearchCenteroaAging，Beifing 100191。China) Abstract Nucleostemin (NS)isahighexpressionnucleolininmanystemcellsandcertaintumors．NS playsimportantrolein theregulation ofcellproliferation and apoptosis，especiallyin cancercells．To investigatetheimpactofNSknock—downofitscellularresponse．wetransientlytransfectedtheNSsiRNA in HepG2cells．W efoundthatNSdown．regulationacceleratedcellproliferation，attenustedtheG phase ofcellcycleandincreasedtheS andG2／M phasessignificantly．Theapoptoticpercentageofcellswas decreased as compared to the control group． The results of confocal colocalization suggested the interactionbetweenNSandS．phasekinase．associatedprotein2 (Skp2)，whichwasverifiedbyCo-IP experiments．The down．regulation ofNS expression enhanced themobilization ofSkp2 from nucleolus indicated itsrole to maintain Skp2 nucleolar