沉默NET1基因.ppt

* * 沉默NET-1基因 对肝癌细胞生物学行为的影响 陈莉，王桂兰，秦婧，吴园园，朱建伟 南通大学附属肿瘤医院病理科 南通大学医学院病理学教研室 肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma HCC）是全球性的健康问题之一。我们南通启东是WHO确定的HCC高发研究现场。 研究基于我们的首次发现NET-1在HCC组织中特定表达，并发现该基因参与HCC细胞的分裂增殖和癌发生、发展密切相关的细胞运动过程,探讨针对NET-1的siRNA抑制肝癌癌细胞株(SMMC-7721)中NET-1基因的表达，及该基因对癌细胞增殖、迁移、内吞的影响。 一、项目研究背景 NET-1与NET-2到NET-7一起统称为NET-X，它们是由Serru等于2000年在EST 数据库中发现的7 个新的含4 次跨膜蛋白超家族( transmembrane 4 superfamily 或tetraspan family, 简称TM4SF) 的成员。 NET-1(C4.8、P503s、Tspan-1) 定位于染色体1p34.1上，其mRNA全长为1297bp(基因库登记号码AF065388)，为TM4SF的成员之一，最近证实其为肿瘤相关基因。 1、NET-1siRNA表达质粒和myc-NET-1重组表达质粒的构建 。 2、细胞培养与转染。 3、细胞内总RNA抽提及RT-QPCR检测NET-1m RNA。 4、Western blot检测NET-1蛋白表达。 5、CCK-8法检测细胞增殖活性。 6、流式细胞仪(FCN)检测各组细胞处于不同细胞周期中的比例与增殖指数。 7、细胞划痕试验检测细胞二围空间的迁移能力。 8、Transwell小室检测细胞三围空间的迁移能力。 9、Capture-ELISA方法测量细胞内生物素标记的转铁蛋白水平。 10、 anti-uPAR标记的癌细胞伪足形成实验。 一、 材料与方法 ? 系统 组织 成人组织 胎儿组织 恶性组织 第一组 第二组 第三组 消化系统 胃 + NA* + 食道 + NA NA 小肠 + NA NA 结肠 + NA NA 直肠 + NA + 胰腺 － NA + 肝 － － + 泌尿生殖系统 肾 + + + 睾丸 + + + 宫颈 + NA (halan 细胞l) + 宫体 + NA