耐有机溶剂菌的筛选及芒果苷衍生物的初步探索.pptVIP

芒果苷生物转化 芒果苷衍生物合成方法 有机溶剂耐受菌:一类新的能与有害影响因素竞争并能在有机溶剂中茁壮生长的微生物 采集土样 转接，稀释涂布，划线单离： 富集与冻存： 筛得耐有机溶剂菌落以及菌株形态（部分）： 底物复筛： 薄层检测： 高效液相色谱分析： 实验小结： 成功筛选出59株耐叔丁醇的菌株。 对这些菌株进行了转化实验，筛选出2株有可能催化芒果苷生物合成芒果苷衍生物的菌株。 展望 在本实验的基础上还可以展开以下研究： 进一步验证所得的菌株能够催化芒果苷合成芒果苷衍生物； 确认该芒果苷衍生物的结构及生理活性； (3) 通过发酵条件的优化提高芒果苷衍生物的产率。 * 耐有机溶剂菌株的筛选及芒果苷衍生物生物合成的初步探索 研究背景： 芒果苷具有广泛的药理活性，如抗氧化，抗炎等，芒果苷对治疗糖尿病，降血脂，免疫调节以及抗肿瘤治疗有很好的应用前景。但由于其溶解性和跨膜通透性均很弱,生物利用度低, 制约了芒果苷药理作用的发挥，为了改善其不足，提高生物利用度，通常在其结构基础上添加基团或者是制备成其单钠盐的形式，即芒果苷衍生物。 芒果苷化学结构式 芒果苷的生 物转化 羟基化 反应 糖基化 反应 提高水溶性 抗氧化活性等 提高水溶性 生物利用度等 微生物转化法 步骤多，副产物多，污染严重，条件苛刻。 条件温和、反应类型多样、无污染、成本低、副产物少 ，能定位反应。 化学合成法 有机介质中酶 催化反应优点 增加底物溶解性度 提高酶热稳定性 提高反应温度 加速反应 改变反应平 衡移动的方向 可控制底物专一性 产物分离 通过溶剂体系调节中药有效成分进行定向的转化或修饰等 实验研究步骤 采集土样 耐有机溶剂菌的筛选 建立耐有机溶剂菌库 底物复筛 分析 初筛 以15%的叔丁醇为筛选压力。 短杆，革兰氏阳性。 菌落小，乳白色，圆形。 NJ-8-2 短杆，革兰氏阴性。 菌落大，白色圆形，有褶皱。 NJ-7-1 细短杆，革兰氏阳性。 菌落极小，红色，圆形。 NJ-6-1 粗短杆，革兰氏阴性。 菌落中等，白色，不规则。 NJ-5-2 长杆，革兰氏阴性。 菌落大，白色，假根状。 NJ-4-2 长杆，革兰氏阴性。 菌落小，淡黄色，圆形。 NJ-3-2 长杆，革兰氏阳性。 菌落小，乳白色，圆形。 NJ-2-1 菌体形态 菌落形态 编号 共筛得59株耐有机溶剂菌，分别有20株G+， 39株G- 。菌株以杆状为主，有6株球状。 菌种的活化 发酵产酶 TLC 及HPLC分析 转化 展层剂： 正丁醇：水：乙酸 5： 4 ： 1 对照 NJ-8-2 NJ-3-2 对照 菌株NJ-8-2 芒果苷衍生物10% 芒果苷 芒果苷 对照： 条件：30%甲醇、流速1.0ml/min、波长316nm。 *