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SmaⅠ酶切基因组DNA , 【酶识别非甲基化的CCCGGG 位点, 而保留甲基化的CCCGGG 位点, 酶切后产生平末端】 再用XmaⅠ酶切, 【该酶可识别甲基化的CCCGGG 位点, 酶切后产生粘性末端】 酶切产物连接接头, 用与接头配对的引物进行PCR 扩增, 只有两端带接头的甲基化的片段才能被扩增, 将差异的甲基化片段进行克隆测序。 甲基化间区位点扩增 (Amplification of intermethylated sites, AIMS) AIMS 流程图 黑色方格： 代表甲基化位点 白色方格： 代表非甲基化位点 END * 化合物库：将不同结构的基础模块, 通过化学合成或生物合成以共价键系统地、反复地进行连接, 从而产生的大批相关化合物。 为高通量筛选提供物质基础，扩大了药物发现的范围 药理筛选， 试验生物活性， 分离鉴定活性化合物的结构， 开发目的物。 免除了单个化合物的单独合成及结构测定, 简化了药物的发现过程。 短时间内合成大量药物前体。 如此 化合物库提供 化合物库中构建块间的相互作用是可逆的。 化合物的构成元素(构件) 可以不停地进行交换,导致化合物与化合物间处于一个动态平衡中, 在热力学控制的条件下,化合物库中各化合物所占的比例由它们的稳定性决定。 当外来因素介导到这个平衡中,平衡发生移动。这样组合库中各化合物所占的比例就会发生变化。 动态组合化学 独特的优点： 靶点对化合物库中的某些分子有识别作用, 导致这些分子在化合物库中的放大, 放大的分子常是所要的先导化合物。 放大有利于被放大化合物的分离和分析。 质谱技术 核磁共振技术(NMR) 毛细管电泳技术 原子力显微镜技术 差式扫描量热技术等等 Chemogenomics 技术平台： 例 有丝分裂纺锤丝二极 例 体外分化 诱导心脏肌肉 诱导神经 例 两栖动物 水蜥 例 成年鼠细胞 例 变异发生 END 非核酸的调控基因信息，本身不改变基因的序列，可通过基因修饰，蛋白质与蛋白质、DNA和其它分子的相互作用，影响和调节遗传基因的功能和特性，通过细胞分裂和增殖周期影响遗传。 又称： 实验遗传学、 化学遗传学、 特异性遗传学、 后遗传学、 表遗传学、 基因外调节系统。 表观遗传学 遗传学改变：改变基因序列→变化基因表达水平, 基因突变、基因杂合丢失和微卫星不稳定等; 表观遗传学改变：非基因序列改变→变化基因表达 水平, DNA甲基化和组蛋白修饰等; 表观基因组学(Epigenomics)： 在基因组水平上对表观遗传学改变的研究。 表观遗传学的分子机制 1、DNA甲基化； 2、 RNA干扰； 3、组蛋白修饰； 4、染色质改型； 表型组(phenome) 某一生物的全部性状特征; 表型组学(phenomics) 系统研究某一生物或细胞在各种不同环境条件下所有表型。 基因组水平上研究表观遗传修饰的领域, 研究生物整体的表现型特征 (表型组) ， genome与环境相互作用 因此：基因组的水平 不改变基因组序列 表观遗传修饰调控基因或基因组表达。 Phenomics 产生 研究 增加基因组认识的新视点： 基因组不仅是序列包含遗传信息， 其修饰也可以记载遗传信息。 1996,衰老研究中心主任Steven A.Garan 在滑铁卢大学演讲上首次提出 Phenomics(表型组学) 。 历 史 1998, 比利时成立CropDesign公司 研发可大规模开发转基因和植物性状评价。 1999，欧洲的生物学家成立 “人类表观基因组联合研究体”， 开始了表观基因组的研究。 2002，Niculescu/Kelsoe 在精神病表型的实验研究中首先引用该术语。 2003 .10人类表观基因组协会(Human epigenome consortium,HEC)正式宣布开始投资和实施人类表观基因组计划(Human epigenome project ,HEP)。 完善人类基因组注释, 了解人类发育机制的本质, 探寻与人类发育和肿瘤疾病相关的表观遗传学机制。 2005，CropDesign公司Christophe Reuzeau等 在《Molecular Plant Breeding》 上发表论文， 细述 “性状工厂”（Trait Mill）:可大规模自动化分析全生育期植物表型的技术设施。 2006，Niculescu等发表PhenoChipping实验定量方法，描述用于表型组学分析的技术。 澳大利亚最早将Phenomics用于设施命名： 澳洲表型组学设施（Australian Phenomics Facility），研究不同基因对老鼠发育的影响。