b第二章微生物发酵产酶.ppt

中期合成型 该类型的酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期以后，酶的生物合成也随着停止。 例如，枯草杆菌碱性磷酸酶（Alkaline phophatase，EC 3.1.3.1)的生物合成模式属于中期合成型。这是由于该酶的合成受到其反应产物无机磷酸的反馈阻遏，而磷又是细胞生长所必不可缺的营养物质，培养基中必须有磷的存在。这样， 在细胞生长的开始阶段, 培养基中的磷阻遏碱性磷酸酶的合成，只有当细胞生长一段时间， 培养基中的磷几乎被细胞用完（低于0.01mmol/L）以后，该酶才开始大量生成。又由于碱性磷酸酶所对应的mRNA不稳定，其寿命只有30 min左右，所以当细胞进入平衡期后， 酶的生物合成随着停止。 细胞 浓度 mg/ml 酶 浓度 U/ml * 滞后合成型 此类型酶是在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物合成并大量积累。又称为非生长偶联型。许多水解酶的生物合成都属于这一类型。 属于滞后合成型的酶，之所以要在细胞生长一段时间甚至进入平衡期以后才开始合成，主要原因是由于受到培养基中存在的阻遏物的阻遏作用。只有随着细胞的生长，阻遏物几乎被细胞用完而使阻遏解除后，酶才开始大量合成。 若培养基中不存在阻遏物，该酶的合成可以转为延续合成型。该类型酶所对应的mRNA稳定性很好，可以在细胞生长进入平衡期后的相当长的一段时间内，继续进行酶的生物合成。 黑曲霉羧基蛋白酶生物合成 放线菌素D 对产酶的影响 (放线菌素D抑制RNA合成) 细胞 浓度 mg/ml 酶 浓度 U/ml 酶 浓度 U/ml 酶 浓度 U/ml 30℃ 22℃ 不加 加入 不加 加入 * 理想的酶合成模式 酶所对应的mRNA的稳定性以及培养基中阻遏物的存在是影响酶生物合成模式的主要因素。其中，mRNA稳定性好的，可以在细胞生长进入平衡期以后，继续合成其所对应的酶；mRNA稳定性差的，就随着细胞生长进入平衡期而停止酶的生物合成；不受培养基中存在的某些物质阻遏的，可以伴随着细胞生长而开始酶的合成；受到培养基中某些物质阻遏的，则要在细胞生长一段时间甚至在平衡期后， 酶才开始合成并大量积累。 在酶的发酵生产中， 为了提高产酶率和缩短发酵周期，最理想的合成模式应是延续合成型。因为属于延续合成型的酶，在发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。细胞一开始生长就有酶产生，直至细胞生长进入平衡期以后，酶还可以继续合成一段较长的时间。 对于其他合成模式的酶，可以通过基因工程\细胞工程等先进技术,选育得到优良的菌株, 并通过工艺条件的优化控制, 使他们的生物合成模式更加接近于延续合成型。 其中对于同步合成型的酶，要尽量提高其对应的mRNA的稳定性，为此适当降低发酵温度是可取的措施；对于滞后合成型的酶，要设法降低培养基中阻遏物的浓度 ，尽量减少甚至解除产物阻遏或分解代谢物阻遏作用，使酶的生物合成提早开始；而对于中期合成型的酶，则要在提高mRNA的稳定性以及解除阻遏两方面下功夫，使其生物合成的开始时间提前， 并尽量延迟其生物合成停止的时间。 * 一般产酶动力学方程可表达为： 式中 X——细胞浓度(g /L) ?——细胞比生长速率(h-1) ?——生长偶联的比产酶系数(IU/g) ?——非生长偶联的比产酶速率(IU/(g?h)) E——酶浓度(IU/L) t——时间(h) （2）产酶动力学 生长偶联型 部分生长偶联型 非生长偶联型 3 基质消耗动力学 基质消耗动力学研究发酵过程中基质消耗速率及各种因素对基质消耗速率的影响规律。 在发酵过程中，培养基中的限制性基质不断被消耗，被消耗的基质主要用于细胞生长、产物生成和维持细胞的正常生理代谢三个方面 在发酵过程中，总的基质消耗动力学方程为： * * * * * 根据不同细胞和不同用途的不同要求，确定各种组分的种类和含量 * 碳素是构成菌体成分的主要元素，也是细胞贮藏物质和生产各种代谢产物的骨架，还是菌体生命活动的能量的主要来源。 * 氮是生物体内各种含氮物质，如氨基酸、蛋白质、核苷酸、核酸等的组成成分。 * 以上是蛋白酶和淀粉酶生产培养基碳氮比的一般规律，但是由于菌种很多而其性质各异。很难说都是符合上述规律的。 * 提供细胞生命活动所必不可缺的各种无机元素，并对细胞内外的pH、氧化还原电位和渗透压起调节作用。 * 发酵中往往产生较多的泡沫。泡沫的存在阻碍了CO2的排除，影响溶氧量，同时泡沫过多影响补料，也易使发酵液溢出罐外造成跑料。 1、碳源 在酶的生物合成法生产过程中，首先要从细胞的营养要求和代谢调节方面考虑碳源的选择；此外还要考虑到原料的来源是否充裕、价格是否低廉、对发酵工艺条件和酶的分离纯化是否影响等