沙冬青肌醇半乳糖苷合成酶(AmGS)基因转化类茶植物红叶石楠及研究.pdf

中文摘要 自然环境下，低温胁迫是植物主要的环境灾害因素，也是许多农作物区域性和季节 性的限定因素，往往会影响植物的生长发育和作物生产率，从而导致严重的经济损失。 传统的植物育种方法在改善植物耐冻性方面具有一定的局限性，利用现代生物学技术对 植物(尤其是木本植物)进行抗冻性改良，具有高效性和针对性，可以加速高抗冻性植 物新品种的选育进程。 of 沙冬青肌醇半乳糖苷合成酶基因(galactinolsynthasegene 分别转化到大肠杆菌和和红叶石楠中，获得了转AmGS基因的大肠杆菌和转AmGS基因 的红叶石楠。初步筛选出抗寒性提高的转基因红叶石楠株系，为用基因工程技术对茶树 等常绿树种进行抗寒性改良提供了重要参考和技术储备。主要研究结果如下： 1、通过AmGS基因的原核表达研究，AmGS基因成功转化大肠杆菌菌株，在低温 下转基因大肠杆菌比转化空载体的大肠杆菌存活率高，说明我们克隆到了预期的AmGS 基因。 2、建立了红叶石楠高效再生体系，外植体应选择水培嫩芽，最佳启动培养基：MS +6．BA 1．0mg／L+NAAO．1mg／L；不定芽诱导培养基：MS+6-BA2．0mg／L+NAA0．5mg／ 0．1 L；茎段再生分化诱导：茎段平铺在MS+6-BA2．0mg／L+NAA mg／L培养基上培 养；生根培养：IBA浓度为生根限制因子，培养基为1／2MS+NAA 0．1 0．05mg／L+IBA 09／L。 rag／t,+蔗糖1 株的死亡率、分化率、分化芽数、芽苗长度、芽苗颜色与遗传转化有关的指标，发现浸 染部位是最重要的影响因子，茎尖是最佳的浸染部位，确定了AmGS基因转化红叶石楠 浓度的MS培养基进行筛选培养。 l 4、本研究中筛选得到32个抗卡那霉素的转基因植株，取其中的R6、R7、R8、R9、 R10、R1 1、R12进行了茎段再生分化培养，对培养的第一代进行PCR分析表明转基因 表达。．． 5、转基因植株的遗传传递和遗传稳定性检测发现，在C1、C2和C3继代植株中， 个别植株出现过PCR阴性的结果，但从C4至C6继代植株中都没出现PCR阴性的植株， 基因株系中能稳定地传递到后代转基因植株中。 6、抗冻表型分析表明，在不同低温条件下，转基因植株都比野生型植株表现出较 高的存活率，抗寒能力明显优于野生型植株，说明导入的抗冻基因提高了红叶石楠的抗 寒性。 7、不同低温处理下转基因植株的生理生化指标研究表明，低温处理后两个转基因 降了4．68℃和4．38℃，说明转基因株系的抗寒能力有了明显提高。 转基因红叶石楠的可溶性蛋白、可溶性糖、游离脯氨酸、MDA等的测定结果也支 持了转基因植株在低温处理后受到的危害减轻，从另一个方面反映了转基因植株的抗寒 性得到了改良。 8、转AmGS基因红叶石楠对土壤微生物影响的初步检测表明，转基因株系和非转 基因株系的微生物类群主要有细菌、真菌和放线菌，以细菌为主要微生物群落。转基因 红叶石楠根际的土壤微生物数量有变化，其中细菌菌群数量变化最大，但对总体组成影 响不大，仍以细菌数量最多，真菌和放线菌次之：在细菌菌群中以芽孢杆菌属的细菌为 主。 本研究为用基因工程技术对茶树等树木进行抗寒性改良提供了重要理论参考和技 术储备，本研究中筛选出的R6、R7两个转基因新株系为进一步培育类茶植物红叶石楠 的抗寒品种提供了选择材料。进一步的研究还在进行中。 关键词：AmGS基因：基因克隆：红叶石楠：抗寒性；树木转基因 ¨ ontransformationof from Study galactinolsynthase